抗菌2号注射液含量测定及制备方法的研究
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【摘要】 目的 研究以HPLC法测定抗菌2号注射液的含量。比较不同制备方法所得注射液中咖啡酸的量。方法 色谱柱：ZORBAXSBC18(4.6 mm×150 mm,5 μm)；流动相：甲醇磷酸盐缓冲液(称取磷酸二氢钠1.56 g，加水使溶解成1 000 ml，用1%磷酸液调pH值为4.0)(23∶77)；柱温：40℃；流速：0.9 ml/min；检测波长323 nm。结果 咖啡酸的平均回收率为101.52%，RSD为1.1%(n=6)。不同方法制备的抗菌2号注射液咖啡酸含量差异较大。结论 此法简便，快捷，结果可靠，分离效果好，可用于抗菌2号注射液的质量评价。以2次煎煮，2次醇提咖啡酸含量最高。
【关键词】 高效液相色谱法；蒲公英；咖啡酸
抗菌2号注射液为我院自制中草药制剂，是菊科植物蒲公英经加工提取制成的灭菌水溶液，具有清热解毒、消痛散结之功效。本文采用高效液相色谱法，测定不同方法制备的12批抗菌2号注射液中咖啡酸的含量，对其方法学进行探讨，并探讨不同制备方法对抗菌2号注射液含量的影响。结果表明，2次水煎煮其咖啡酸含量比一次水煎煮高65%，将药材不经粉碎与粉碎后相比较，后者高出前者25%，且将注射液pH值调至5～7时，注射液稳定，放置无浑浊产生，现将结果报道如下。
1 仪器与试药
1.1 仪器 日本岛津高效液相色谱仪(LC10A泵，SPD10A检测器)；ZORBAX SBC18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5 μm)；Echrom98色谱工作站(大连依利特有限公司)。
1.2 试药 蒲公英药材由我院药房购进，中药科鉴定为菊科植物蒲公英(Taraxacum mongolicum HandMazz)的干燥全草。咖啡酸对照品由中国药品生物制品检定所提供。甲醇、磷酸为优级醇，其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 抗菌2号注射液的制备方法方法Ⅰ号：称取蒲公英药材1 000 g，洗净尘土，加水煎煮0.5～1 h，滤过，滤液浓缩至500 ml，加95%乙醇使含醇量达75%，摇匀，静置，2 d后滤过，回收乙醇，加水至500 ml，冷藏，静置2 d，滤过，脱色，滤液加吐温80和苯甲醇，溶解后加水至100 ml，用10% NaOH调pH值至5～7，待测。方法Ⅱ号：称取蒲公英药材1 000 g，洗净尘土，2次水煎煮，同上操作。方法Ⅲ号：称取经粉碎后的蒲公英药材1 000 g，洗净尘土，2次水煎煮，同上操作。方法Ⅳ号：称取经粉碎后的蒲公英药材，2次水煎煮，合并滤液，浓缩至500 ml，加95%乙醇使含醇量达75%，摇匀，2 d后滤过，回收乙醇，浓缩至350 ml，再加95%乙醇，使含醇量达80%，摇匀，静置，2 d后滤过，回收乙醇，加水至500 ml，冷藏，静置2 d，滤过，脱色，滤液加吐温80和苯甲醇，溶解后加水至1 000 ml用10% NaOH调pH值5～7，待测。
2.2 测定条件 (1)测定波长的选择：将咖啡酸对照品制成0.15 μg/ml的甲醇液，于360～200 nm波长范围内进行紫外扫描，在323 nm处有最大吸收，故检测波长定为323 nm。(2)色谱条件：流动相：甲醇磷酸盐缓冲液(称取磷酸二氢钠1.56 g，加水使溶解成1 000 ml，用1%磷酸调pH值为4.0)(23∶77)；柱温40℃；流速0.9 ml/min；检测波长323 nm，在该条件下的色谱图见图1。
A.咖啡酸对照品 B.样品
图1 咖啡酸HPLC图谱(略)
2.3 标准曲线的制备 精称咖啡酸对照品15 mg，置100 ml量瓶中，加甲醇适量，振摇使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品贮备液。精密量取贮备液2、4、6、10、14、18 ml，分别置50 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，在前述色谱条件下，分别取20 μl注入液相色谱仪，记录色谱图，以峰面积为纵坐标，浓度(μg/ml)为横坐标，进行线性回归，得回归方程为：A=11341.9C-100769.9，r=0.9998(n=6)。
2.4 回归率实验 采用加样回收实验，分别取不同量的咖啡酸对照品贮备液加入已测知含量的抗菌2号注射液中，依法测定，计算回收率为101.52%，RSD为1.1%(n=6)。
2.5 精密度实验 取标准曲线其中1份溶液，重复进样6次，测得咖啡酸峰面积平均值为27 982.255(n=6)，RSD为1.5%。
2.6 抗菌2号注射液的含量测定 精密量取待测样品2.00 ml置5 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，精密量取20 μl，注入色谱仪，记录色谱图，代入标准曲线方程，计算出待测样品中咖啡酸的含量。结果：制备方法Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ咖啡酸的含量分别为20.34、35.89、45.32及50.78 μg/ml。
3 小结与讨论
3.1 蒲公英化学成份主要为蒲公英甾醇乙酸酯、咖啡酸、绿原酸、胡萝卜苷等[1]，采用HPLC法测定蒲公英中的指标成份咖啡酸[2]，其方法灵敏度高，重现性好，方法可行。
3.2 试验结果表明，不同制备方法所得抗菌2号注射液中咖啡酸含量差异较大，以2次水煎煮、2次醇提取咖啡酸含量较高，故有必要增加其含量测定方法，来提高药品质量，规范医院制剂。
3.3 不同制备方法所得抗菌2号注射液中，另一成份绿原酸的含量情况尚在进行中。
参考文献
1 凌云,鲍燕燕,张永林.兴安蒲公英的化学成份研究.中草药杂志,2000,31:10.
2 中华人民共和国药典2005年版一部/国家药典委员会编第1版北京：化学工业出版社，20051蒲公英，P244
作者单位： 050051 石家庄市，河北省人民医院药学部
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