异烟肼双层栓的研制及药动学
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异烟肼自1952年应用于临床以来，一直是有效抗结核的药物，但在其抗结核的过程中，不良反应较多。作者设想可通过将其制成栓剂，以减少副作用。为扩展此药的剂型同时考虑到异烟肼药效不仅与血中药物峰浓度有关，且与其有效浓度的维持时间有关[1]，考虑将其制备为双层栓。双层栓外层采用低熔点基质，内层采用高熔点基质，以期达到上述目的。作者参考了《药剂学》[2]以及国外专利方法，拟定栓剂速释部分与缓释部分的处方组成。
1 仪器与药品
异烟肼标准品(河北省药检所提供)，异烟肼粉(天津河北制药三分厂)，异烟肼片剂(张家口制药总厂)；聚乙二醇(PEG)1000，PEG 4000，PEG 6000(天津市天泰精细化学品有限公司)；36型半合成脂肪酸酯，乌桕酯(杭州化工厂)；7500型紫外可见分光光度计(上海光学仪器厂)；体外溶出度测定仪(天津大学无线电厂)；尿道栓模及肛门栓模，其他试剂均为分析纯。
2 实验方法
2.1 标准曲线的绘制及回归方程的求解[3] 精密称取异烟肼100 mg，置250 ml容量瓶中，分别精密量取1、3、5、7、9、11 ml，置100 ml容量瓶中，加人工肠液至刻度，置7500紫外分光光度计于263 nm处测定吸收度A，求得回归方程为：Y＝0.1265+31.1709X，r=0.9989。
2.2 回收率实验[4] 精密称定异烟肼20、40、60 μg溶于人工肠液中，按标准曲线项下的方法测定吸收度，计算回收率，结果回收率分别为：97.06%、93.50%、94.27%，±s为(94.94±1.87)%(n=3)。
2.3 双层栓的制备 先按处方Ⅱ，PEG 4000 20.5 g、PEG 6000 20.5 g、水3 ml、甘油2 g、异烟肼4 g，以热溶法制备高熔点栓，取基质在水浴中加热熔融后，在搅拌下加入异烟肼，混合均匀后乘热倾入尿道栓模具中，冷却、脱模，备用。按处方Ⅰ，PEG 1000 38.5 g、PEG 4000 1.6 g、水4 ml、甘油2 g、异烟肼4 g，以热熔法制备低熔点栓：取基质在水浴中加热熔融后，在搅拌下加入异烟肼，混合均匀后乘热倾入肛门栓模中，稍微冷却后将已制好的高熔点栓插入到底(尽量从中心插入)。待完全冷却凝固后，用刀片刮去栓模上多余的基质，即得。
2.4 含量测定[5] 取一枚栓剂置于50 ml烧杯中，水浴加热融化，加少许水溶解，转移至250 ml容量瓶中，加人工肠液至刻度摇匀，过滤，弃去初滤液，精密量取续滤液5 ml，置100 ml容量瓶中，加人工肠液至刻度。用7500紫外分光光度计测定吸收度A，代入回归方程中求得介质浓度，进而计算出相应的栓剂含量(相当于标示量)，并与标示量对比。结果：1号栓含量93.27%，2号栓含量94.74%，3号栓含量96.57%，4号栓含量94.65%，5号栓含量93.75%，6号栓含量95.12%；±s为(94.64±3.40)%。
25 双栓和普通栓的体外溶出度比较 (1)双层栓的体外溶出度测定：采用转篮法，将一枚栓剂置于不锈钢网篮中，外面用0.8 μm微孔滤膜包覆成筒状，再将筒置于转篮中，溶出介质为人工肠液900 ml，温度(37.5±0.1)℃，转速150 r/min。定时取样5 ml，过滤(每次取样后立即补充介质5 ml)，弃去初滤液，精密量取续滤液4 ml置10 ml容量瓶中，加人工肠液至刻度，在波长263 nm处以溶出介质为空白，测定吸收度A，按回归方程计算出各时间的介质浓度，进而计算出相应药物溶出百分率。(2)普通栓的体外溶出测定：栓剂采用Ⅰ号处方制备的含药栓，每枚含药量100 mg，其余操作见2.3项下。结果表明双层栓释药缓慢。
2.6 双层栓、普通栓、片剂兔体内生物利用度测定 (1)标准曲线的绘制[3]：精密称取异烟肼标准品5 mg，置100 ml量瓶中，加蒸馏水至刻度，制成50 μg/ml的标准溶液。精密量取此溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 ml，分别加蒸馏水至1 ml，加兔血浆1 ml，5%三氯醋酸5 ml，摇匀，放置10 min，离心(3000 r/min)10 min。过滤，弃去初滤液，精密量取续滤液3 ml置刻度试管中，加1.5 mol/L NaOH试液0.5 ml(使pH值9～10)，0.1%1，2萘醌4碘酸钠溶液0.5 ml，蒸馏水1 ml，摇匀，放置20 min，以空白血浆为对照，在波长475 nm处测定吸收度A，将A与浓度C(μg/ml)进行回归分析，得回归方程：Y＝-2.1657+41.7438X，r=0.9972回收率，±s为(95.79±1.9)%。(2)普通栓血药浓度的测定[3]：取体重约2 kg的新西兰兔6只，雌雄各半。用药前1 d下午禁食，翌晨，从兔耳静脉注射肝素300 U，从另一耳静脉取血1.0 ml作空白对照。然后经肛门给予普通栓0.1 g/只(栓剂给药后肛门用塑料夹封闭4 h)，于0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、3、4、5、6 h分别取血1 ml，加入盛有5%三氯醋酸5 ml的抗凝血中，摇匀，放置10 min，离心(3000 r/min)10 min。过滤弃去初滤液，精密量取续滤液3 ml置刻度试管中，加1.5 mol/L NaOH试液0.5 ml(使溶液pH值9～10)，0.1%1，2奈酯4磺酸钠溶液0.5 ml，蒸馏水1 ml，摇匀，静置20 min，以空白血浆对照，置7500紫外分光光度计中，在波长475 nm测定吸收度A，进而求得各时间的血药浓度。(3)双层栓血药浓度的测定：10 d后，取(2)项下的新西兰兔6只，以(2)法给予双层栓每只0.1 g，进而求得各时间的血药浓度。(4)异烟肼片剂血药浓度的测定：10 d后，取(2)项下的新西兰兔6只，以灌胃法给予异烟肼片(0.1 g/片)，进而求得各时间的血药浓度。
3 实验结果
测得的生物利用度数据经统计学处理，见表1。发现：(1)双层栓与普通栓之间曲线下面积(AUC)差异非常显著(P<0.01)，双层栓与片剂之间AUC差异非常显著(P<0.01)；(2)双层栓与普通栓之间Cmax差异无显著性(P>0.05)，双层栓与片剂之间Cmax差异非常显著(P<0.01)；(3)双层栓与普通栓之间Tpeak差异非常显著(P<0.01)，双层栓与片剂之间Tpeak差异非常显著(P<0.01)；(4)双层栓与普通栓与片剂三者之间T1/2ke差异均非常显著(P<0.01)；(5)以片剂生物利用度为100%，求出双层栓及普通栓的相对生物利用度，分别为：普通栓(120.30±11.60)%，双层栓(100.57±6.45)%，经统计学处理两者之间差异非常显著(P<0.01)。
表1 单剂量给予异烟肼(100 mg)后的药物动力学参数(略)
注：与普通栓比较，P<0.01；与片剂比较，△P<0.01
4 讨论
41 双层栓的Tpeak、Cmax、F%均明显高于片剂，其原因可能是栓剂的吸收速度常数大，同时栓剂给药后，约有一半药物直接进入大循环，而不经肝脏代谢所致。双层栓的AUC、F%均明显高于普通栓，而Tpeak、T1/2ke低于普通栓，提示双层栓的血药浓度时间曲线峰较钝，也即：其峰顶上有一定的平台期，3p87药代处理软件自动拟合的曲线也证明了这一点。本实验仅对异烟肼双层栓在兔体内的药时曲线进行了考察，证明其能够较片剂更快达到Cmax，并且能在药时曲线的峰顶上形成一个平台。但具体到人体，Cmax应控制在何种浓度，有效治疗浓度能维持多长时间，栓剂的含药量应为多少，应继续研究。所以，能否据此认为，异烟肼双层栓的疗效优于异烟肼片，尚需进一步研究其在人体内的动力学情况。
42 在本实验中双层栓的体外溶出度测定没有采用转篮法，而是参考了《药剂学》上所推荐的方法：将待测栓剂置于透析管适宜的微空滤膜中，将其浸入盛有介质并附有搅拌器的容器中，于37℃每隔一定时间取样测定，每次取样后补充同体积的溶出介质。之所以这样做是因为PEG栓的溶解速度较快(1 h内即溶解)，如采用一般方法，其缓释层的释放曲线很可能不显著。采用本方法后，实验时间延长，内、外层曲线之间的斜率差异也较明显。
43 双层栓作为一种既有速释又有缓释的栓剂，能适应临床治疗疾病的需要或不同性质药物的要求。国外曾开发出一种以双氯灭痛作为模型药物的Witepsol15作中空栓剂，由含油和硬脂醇的半固体骨架构成缓释层的双层栓，经兔体实验表明，双层栓剂生物利用度约为100%，平均滞留时间比普通栓剂增加两倍。而由于水平及条件上的局限，在基质的选择和新型基质的利用上，尚有诸多不足。
44 异烟肼如制成肛门栓，约有一半左右不通过门肝系统，而通过中下直肠静脉和肛管静脉，绕过肝脏，从下腔大静脉直接进入大循环而起作用，减少了异烟肼在肝脏乙酰化所导致的肝损害；因此，异烟肼双层栓对于长期使用异烟肼治疗的患者以及已有肝脏病交叉感染结核病的患者适宜，此栓给药方便，是抗结核病治疗中的一种很值得推广的药物剂型。
参考文献
1 侯惠民，朱金屏，陈国美，等以水溶性高分子材料为基质制备长效水解片药学通报，1981，16：21
2 毕殿州药剂学第4版北京：人民卫生出版社，2001362365
3 陈立新维生素B6对异烟肼生物利用度的影响中国医院药学杂志，1984，4：3435
4 孔晓龙异烟肼肺靶向性微球的制备及其小鼠体内分布中国医院药学杂志，1999，19：513517
5 邢桂琴，张淑秋，卢齿生，等异烟肼栓剂的研制山西医学院学报，1994，25：3739
作者单位： 050051 石家庄市，河北医科大学第三医院制剂室
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