李涛 牛丽娟 刘文宣 杨磊 李曼 曹丹丹 彭乱顺

    ·论著·

    沉默KLF4表达对人肝星状细胞HSC-LX2生物学行为的影响

    李涛 牛丽娟 刘文宣 杨磊 李曼 曹丹丹 彭乱顺

    目的 筛选有效沉默KLF4基因表达的siRNA，观察KLF4基因沉默对人肝星状细胞HSC-LX2生物学行为的影响。方法 设计并化学合成针对人KLF4基因的3对siRNA(siRNA1、siRNA2、siRNA3)，转染人肝星状细胞HSC-LX2，以转染非特异siRNA作为阴性对照。采用实时荧光定量RT- PCR(Real-time RT-PCR )和Western blot方法分析KLF4 mRNA和蛋白的表达情况，筛选出沉默KLF4效果最好的1个siRNA,将其转染入HSC-LX2后，用MTT法检测KLF4沉默对HSC-LX2增殖的影响。采用ELISA法检测细胞培养上清中的转化生长因子1 (transforming growth factor，TGF-1)、白介素1(interleukin-1，IL-1)和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)的表达情况。结果 Real-time RT- PCR和western blot均显示siRNA3沉默效果最好。故后续试验均采用siRNA3沉默KLF4的表达。MTT实验结果显示，在转染siRNA3，12 h、24 h和48 h后，细胞活力出现明显下降。ELISA结果显示，转染siRNA3，48 h以后，TGF-β1、TNF-α、IL-1β表达量也明显降低。结论 siRNA3可有效沉默KLF4基因表达，KLF4基因沉默可以抑制HSC-LX2的增殖，影响其生物学行为，使细胞中的促进胶原表达的三种细胞因子TGF-1、TNF-α以及IL-1表达量下降。

    人肝星状细胞；KLF4；转化生长因子β1；肿瘤坏死因子α；白介素1

    肝纤维化过程中，肝星状细胞(hepatic stellate cells，HSCs)的激活是其核心环节。各种因素通过不同方式和途径作用于肝脏中的HSCs，导致其生物学行为及功能变化，引起肝纤维化[1]。因此，如果能够抑制HSCs的行为和功能变化，就可以减轻甚至逆转肝纤维化。KLF4是Krüppel样因子(Krüppel-like factors，KLFs)家族的重要成员，具有调节某些细胞的增殖、分化以及凋亡等重要功能[2]。KLF4是否会对HSCs的细胞生物学行为产生影响，目前还缺乏此方面的研究。本研究观察沉默KLF4表达是否可以抑制HSCs的行为和功能变化 ......