喻建 牟文辉 向英豪 王波涌

    乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤，具有较高的发病率与死亡率[1]。研究显示，细胞增殖及转移速度快是乳腺癌发生发展的主要特点[2]，因而探究乳腺癌发病机制进而寻求治疗新靶点成为研究热点。研究表明，微小RNA-429(miR-429)在非小细胞癌等多种恶性肿瘤中呈低表达，可参与细胞增殖、凋亡及侵袭等生物学行为[3]。研究表明，Wnt/β-链蛋白(β-catenin)经典通路可参与乳腺癌发生及发展过程[4]。研究显示，miR-429可通过抑制Wnt/β-catenin信号通路进而抑制上皮性卵巢癌细胞增殖及侵袭[5]。然而关于miR-429与乳腺癌发生及发展的研究笔者所见较少。因此，本研究旨在通过miR-429过表达分析其对乳腺癌细胞增殖、侵袭及Wnt信号通路的影响，进一步揭示乳腺癌发生机制提供理论依据。

    1 资料与方法

    1.1 一般资料 收集2017年8月至2018年6月在利川市人民医院进行手术治疗的76例乳腺癌患者的癌组织标本为乳腺癌组，另选取距癌组织边缘>5 cm的对应癌旁组织标本为癌旁组。患者经病理证实为Ⅰ～Ⅱ型，手术切除组织迅速置于10%甲醛中。患者年龄28～79岁，平均年龄(52.6±7.6)岁。

    1.2 主要试剂与仪器 乳腺癌细胞MCF-7(TCHu74)购自中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库。DMEM细胞培养液与10%胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)均购自美国Gibco公司；MTT检测试剂盒购自美国Sigma公司；LipofectamineTM2000转染试剂盒购自美国Invitrogen公司；miR-429阴性对照质粒购自上海吉玛制药有限公司；Trizol Reagent核酸分离试剂购自日本Takara公司；FastQuant RT Kit(RNA反转录试剂盒)与SYBR Green试剂盒均购自北京天根生化科技有限公司；兔抗β-链蛋白(β-catenin)、磷酸化糖原合成酶激酶-3β(p-GSK-3)一抗均购自美国Bioworld公司；羊抗兔、羊抗鼠二抗均购自美国ROCKLAND公司；ki67、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、细胞周期相关蛋白1(CyclinD1)、原癌基因c-Myc抗体均购自美国Abcam公司；Matrigel基质胶购自上海前尘生物科技有限公司；Transwell小室购自美国BD公司；BCA试剂盒、蛋白提取试剂盒均购自碧云天生物技术研究所；ECL化学发光剂试剂盒购自上海翊圣生物科技有限公司 ......