文放放 李熊刚

    肝癌是指来源于肝细胞和肝胆管细胞的恶性肿瘤，分为原发性和继发性两类，在我国高发且危害极大的一种临床常见恶性肿瘤，早期肝癌症状常无特异性，中晚期肝癌的症状则较多，我国肝癌病死率占全球肝癌病死率的50%，占我国肿瘤致死性疾病第二位[1,2]。肝癌早期缺乏典型症状，诊断率低，患者一经确诊多已进入终末期，失去手术治疗指征，肝癌终末期极易扩散，很难治愈，病死率高[3]。因此寻找具有抗癌活性的药物成为近来临床研究热点。羟考酮(Oxycodone)是从蒂巴因中自然衍生的半合成物，属于一种强阿片类镇痛药物，临床常用来治疗癌症和慢性非癌症性疼痛[4]。研究报道，羟考酮预先给药可通过激活磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)通路、JAK2/STAT3通路等减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤，抑制心肌细胞凋亡[5,6]。PI3K/Akt通路是一种重要凋亡抑制通路，通过对靶蛋白磷酸化发挥抗凋亡作用，可促进肝癌细胞生长、增殖、黏附能力及黏附分子表达[7,8]。然而关于羟考酮对肝癌HepG2细胞生物活性的影响笔者所见鲜有研究，因此本研究探讨不同浓度羟考酮对肝癌HepG2细胞增殖、凋亡及对PI3K/Akt通路的影响。

    1 材料与方法

    1.1 细胞株、主要试剂与仪器 HepG2细胞来源于中国医学科学院，由本科室体外培养冻存备用；盐酸羟考酮注射液(Oxycodone)均购自美国Gibco；MTT试剂盒(货号：11465007001)、AnnexinV-FITC凋亡检测试剂盒(货号：APOAF)购自美国Sigma。鼠源一抗β-actin抗体(货号：MA5-15739)、Bcl-2(货号：13-8800)、Bax(货号：MA5-13994)、PTEN(货号：MA5-12278)、AKT(货号：AHO1112)、兔源cleaved-Caspase3(货号：700182)、p-AKT(货号：MA5-14916)抗体、PI3K(货号：PA5-32550)，p-PI3K(货号：MA5-14870)二抗羊抗鼠IgG(货号：A-11001)羊抗兔IgG(货号：A-11008)均购自美国Invitrogen；CO2培养箱(美国，Thermo Fisher)、荧光显微镜(日本，奥林巴斯)等。

    1.2 实验方法

    1.2.1 细胞培养:配制含有10%FBS、1%青链霉素RPMI 1640细胞培养液 ......