李小龙 陈海生 吉飞跃

    肺癌是全球恶性肿瘤相关死亡的主要原因。肺癌包括非小细胞肺癌和小细胞肺癌两种类型，其中非小细胞肺癌占所有肺癌病例的80%～85%，其5年生存率较低，即使对早期患者进行有针对性的手术，术后复发率也高于其他类型的癌症[1]。肿瘤转移是导致非小细胞肺癌死亡的主要原因，但转移扩散的分子机制尚不清楚。最近的证据表明，miRNA在肿瘤转移中起着重要的作用[2,3]。miR-514b-3p定位于X染色体，研究发现miR-514b-3p在直肠癌中明显下调表达，miR-514b-3p通过增加上皮标志物和减少间充质标志物的表达来减少结直肠癌细胞的迁移、侵袭和耐药性[4]。但miR-514b-3p在肺癌中的表达情况笔者还未见报道，miR-514b-3p在肺癌中的功能和作用机制也不明确。本研究分析miR-514b-3p表达与肺癌细胞增殖、迁移、侵袭的关系，探讨其作用机制，以期为肺癌临床生物靶点的开发奠定理论基础。

    1 材料与方法

    1.1 材料 收集2017年11月至2018年10月于我院确诊并进行手术切除的52例肺癌组织及其相应的癌旁组织标本，年龄30～75岁，平均年龄(50±7)岁。按照肿瘤-淋巴结-转移分期，Ⅰ期15例，Ⅱ期17例，Ⅲ期20例。患者术前均未接受放疗、化疗。开展本研究前患者均签订知情同意书，并获得医院伦理委员会批准。

    1.2 仪器与试剂 肺腺癌细胞系A549购于美国ATCC；DMEM培养液、青链霉素混合液、胎牛血清均为美国Gibco公司产品；转染试剂Lipfectmine 2000为Invitrogen公司产品；兔源Ⅰ抗CyclinD1、P21、MMP-2、GAPDH购于美国Abcam公司；鼠源Ⅰ抗E-cadherin购于美国Santa Cruz公司；羊抗兔以羊抗鼠Ⅱ抗为武汉博士德公司产品；miRNA反转录和定量PCR试剂盒购自上海天根生化公司；miR-514b-3p mimics、miR-NC、si-MDM2、si-NC、anti-miR-NC、anti-miR-514b-3p、pcDNA3.1和pcDNA3.1-MDM2、以及WT-MDM2和MUT-MDM2的构建测序均由上海吉玛制药有限公司提供；四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium，MTT)试剂盒购于北京索莱宝公司；Transwell小室和基质胶购自美国corning公司。

    1.3 细胞培养、转染与分组 采用DMEM培养液(含10%胎牛血清含量和1%青链霉素溶液)培养A549细胞 ......