刘丽丽 严佳栋 许晓东 徐志英 曹莺

    肝癌的发病率在全球癌症中排名第5位，在癌症导致的死亡率中排名第二[1]。在世界范围内，中国的肝癌发病率最高，每10万人口中，约有25.7人新诊断为肝癌[2]。肝癌的治疗手段包括化疗、肝切除术、肝移植和免疫治疗等。随着科技的发展，尽管对肝癌的研究取得了很多进展，但是在发展中国家，肝癌的治愈率很低。这就需要寻找新的、疗效更好、更低的药物来治疗肝癌。小檗胺是从小檗等中草药中分离得到的一种双苄基异喹啉类生物碱。盐酸小檗胺片在临床上用于治疗白细胞减少症，且无明显的不良反应[3]。近年来，研究发现小檗胺拥有抗肿瘤活性，能够抑制肺癌细胞的增殖[4]、抑制乳腺癌细胞的侵袭转移[5]、诱导肝癌细胞的凋亡[6]。然而，小檗胺在体内对肝癌的作用目前还没有研究。卵巢肿瘤相关蛋酶B1(OTU domain-containing ubiquitin aldehyde-binding protein B1，OTUB1)隶属于去泛素化酶(DeUbiquitinating Enzymes，DUB)超家族，在人类肝、肾、脑等组织中广泛表达。研究表明，OTUB1在非小细胞肺癌及肝癌细胞中表达上调[7,8]，在肝癌患者中，OTUB1的表达量与肝癌的TNM分期、转移性明显相关，OTUB1表达量越高，TNM分期值越大，肝癌患者越容易发生转移，患者的预后越差。另外，研究表明OTUB1能够抑制抗凋亡蛋白p53的表达[9]，p53是抑癌基因，在维持细胞完整性和防止细胞癌变中发挥重要作用。但是截至目前，还没有研究表明小檗胺抑制肝癌的作用与OTUB1有关。我们假设小檗胺能够在体内外抑制肝癌细胞系SMMC-7721的增殖、侵袭转移，并且这种作用可能是通过调节OTUB1的表达来实现的。

    1 材料与方法

    1.1 试剂 小檗胺购自上海诗丹德生物技术有限公司(批号：1895，纯度>98%)。制备成浓度为100 mmol/L的储存液，在每次试验中用细胞培养液稀释到所需浓度。环磷酰胺(货号：PHR1404)购自Sigma。胎牛血清(FBS，批号：SV30087.02-NZJ1221)购自Hyclone，RPMI培养液(货号：2141287)购自Gibco。抗体p53(批号：GR136120-36)购自Abcam，OTUB1(批号：A1618)、caspase-3(货号：sc-7272)、Bcl-2(货号：sc-578)、Bax(货号：sc-7480)和β-actin(货号：sc-8432)购自 Santa Cruz Biotechnology ......