李永慧 王倩林 贾笑强 刘明成 李永芳

    结直肠癌是常见的恶性肿瘤之一，近年我国结直肠癌发病率和死亡率呈上升趋势，严重危害人们生命健康[1]。目前结直肠癌的治疗方法是手术、放化疗及靶向治疗的综合治疗，患者预后有显著改善，但对于存在局部复发或远处转移的晚期结直肠癌患者，预后仍然很差[2]。因此，寻找有效的结直肠癌治疗方法尤为重要。微小RNA(microRNA，miRNA)是一种单链小分子RNA，长度约19～22nt，在生物体基因组广泛存在，通常在转录后水平调控基因表达，在细胞增殖、凋亡、肿瘤发生等过程中发挥重要作用[3,4]。miR-216a是miRNA家族成员，有研究显示，结直肠癌中miR-216a表达降低，miR-216a-3p可直接靶向COX-2和ALOX5抑制结直肠癌细胞增殖[5]。柚皮苷是一种主要存在于葡萄柚、柚子、酸橙等果皮和果肉中的天然黄酮类化合物，有抗氧化应激、降血糖、抗炎、抗肿瘤等广泛的生物学活性[6-8]。有研究显示，柚皮苷对前列腺癌、卵巢癌等多种肿瘤细胞生长有抑制作用[9,10]。结直肠癌中柚皮苷的研究较少，有研究显示，在化疗模型小鼠中，柚皮苷可降低结直肠癌癌前病变及结直肠癌重构[11]；柚皮苷可防治偶氮甲烷/葡聚糖硫酸钠诱发的小鼠慢性结直肠炎及癌变[12]。柚皮苷对人结直肠癌细胞生长影响及机制尚未明确。有研究显示，柚皮苷可调控miR126/VCAM1抑制非小细胞肺癌生长[13]。因此，本研究旨在柚皮苷是否可调节miR-216a影响结直肠癌细胞增殖和凋亡，以期为结直肠癌治疗提供理论依据。

    1 材料与方法

    1.1 主要试剂与仪器 柚皮苷购自中国药品生物制品检定所；RPMI 1640培养基和青链霉素均购自美国Gibao公司；胎牛血清购自杭州四季青公司；总RNA提取试剂盒、BCA蛋白浓度测定试剂盒、细胞裂解液、ECL发光液及细胞凋亡试剂盒均购自中国碧云天；KIAA1199抗体购自美国Abcam公司；脂质体2000试剂均购自美国Invitrogen公司；MTT、DMSO均购自美国Sigma公司；双荧光素酶报告基因检测试剂盒购自美国Promega公司；酶标仪购自美国Bio-Rad公司；流式细胞仪购自美国BD公司。

    1.2 细胞培养 结直肠癌细胞系SW620、LOVO和HCT116及正常结肠上皮细胞NCM460均购自美国ATCC。使用含10%胎牛血清的RPMI 1640培养基，置于5%体积分数CO2、37℃培养箱培养细胞。每天换液1次。细胞达80%～90%生长密度时进行传代。实验为生长至对数期的细胞 ......