张艳丽 唐文慧 苏军 马红霞

    肺癌(lung cancer)是世界上发病率、死亡率最高的恶性肿瘤，威胁着世界人类的生命健康[1]。由于80%以上为非小细胞肺癌，其确诊时大多已至晚期，失去最佳手术时机，放化疗成为肺癌治疗的首选[2]。顺铂是癌症化疗最主要的药物，可抑制肿瘤细胞的DNA 合成，诱导癌细胞凋亡，达到抑制肿瘤细胞生长的作用[3]。其在肺癌早期和晚期均具有良好的抗癌作用，患者一旦产生耐药性极易死亡。因此，耐药成为克服肺癌治疗的一大难题。非编码RNA在各种人类疾病中的关键作用，其可分为短链RNA(18～23个核苷酸)和长链非编码RNA(lncRNAs；>200 个核苷酸)[4]，其中lncRNA已经成为癌症生物学研究中最主要的一类非编码RNA，据报道lncRNA可通过靶向miRNA进而调控相关基因表达、蛋白质合成、RNA转运等[5]。 研究发现lncRNAs也调节药物转运并最终调节抗性[6,7]。长链非编码RNA HNF1A-AS1(Lnc RNA)在肺癌中发挥促进癌症进一步恶化作用[8]，其对肺癌化疗的敏感性是否也具有调控作用，尚且未知。本研究拟检测顺铂耐药肺癌细胞H520/DDP中HNF1A-AS1及miR-32-5p的表达，观察其对H520/DDP顺铂敏感性、凋亡的影响。

    1 材料与方法

    1.1 材料 肺鳞状细胞癌细胞H520购自ATCC；DMEM培养基、MTT均购自美国Sellect公司；逆转录试剂盒、LipofectamineTM2000购自大连宝生物工程公司；BCA蛋白定量试剂盒购自美国Pierce公司；PVDF膜购自德国Roche Diagnostics公司；ECL发光液购自Thermo Fisher Scientific公司；SDS-PAGE 试剂盒、RIPA蛋白裂解液均购自Beyotime Biotechnology；Annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒购自北京Solarbio公司。

    1.2 方法

    1.2.1 细胞培养:在37℃、5% CO2的恒温培养箱中 ......