沈娜

    乳腺癌是全世界女性中最普遍的癌症类型，其发病率和死亡率较高，严重危害女性生命健康[1]。75%的乳腺癌是雌激素依赖型肿瘤，雌激素信号传导通路在乳腺癌的发生、发展过程中起主要作用[2]。雌激素受体α(estrogen receptor-α，ERα)调节参与调节癌细胞的增殖、侵袭和迁移，在乳腺生物学和发育中起关键作用[3]，ERα及其相关信号通路介导上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)影响乳腺癌细胞的侵袭过程[4]。目前研究发现miR-301a是一种致癌性miRNA，与结直肠癌和乳腺癌等多种癌症的进展和不良预后有关[5]，但miR-301a对雌激素依赖性乳腺癌雌激素受体ERα调控作用研究笔者所见较少。本研究采用双荧光素酶报告试验验证miR-301a与ERα的靶向关系，探讨二者在乳腺癌细胞侵袭及EMT中的调控机制，为治疗提供新的靶点。

    1 材料与方法

    1.1 材料 细胞株：人乳腺癌细胞MCF7(HZ-CC100452)购自上海沪震实业有限公司。

    1.2 细胞培养及实验设计分组

    1.2.1 细胞培养：将MCF7细胞从液氮罐中取出，解冻并离心收集细胞，用含10%胎牛血清(美国Hyclone公司)的DMEM培养基(美国Hyclone公司)悬浮细胞并接种于细胞皿中，置于37℃、5%CO2、饱和湿度条件下培养，细胞密度达80%时，对细胞进行传代、计数。

    1.2.2 试验设计及分组：收集对数生长期、生长状态好的MCF7细胞，分为control组(不做任何处理，正常培养)、miR-301a mimics组[转染miR-301a激动剂(miR-301a mimics，货号：CMH0147，购自广州威佳科技有限公司)]、miR-301a inhibitiors组[转染miR-301a抑制剂(miR-301a inhibitiors，货号：hsa-mir-301a-3p，购自江苏百奥迈科生物技术有限公司)]、miR-301a MNC组[转染miR-301a激动剂阴性对照试剂(miR-301a MNC)]、miR-301a INC组[转染miR-301a抑制剂阴性对照试剂(miR-301a INC)] ......