人幽门螺杆菌热休克蛋白A编码基因的克隆及表达(1)
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【摘要】 目的 扩增人幽门螺杆菌(Hp)热休克蛋白A(HspA)编码基因并构建其重组表达载体，进行核苷酸序列分析，并在E.coli BL21中表达，为疫苗的开发奠定了基础。
方法 利用PCR技术从Hp基因组DNA中扩增热休克蛋白A(HspA)基因片段，目的基因经SacⅠ和XhoⅠ双酶切、纯化后，插入pET32a(+)载体。以含目的基因片段的重组载体转化大肠杆菌BL21并表达。结果 经PCR、酶切、测序分析表明，插入的基因片段为Hp HspA编码基因，与GenBank报道的相比较，核酸同源性达98%。经SDS-PAGE分析，表达的融合蛋白分子量约为33 KD，其中目的蛋白的分子量约为13 KD。结论 成功地克隆并表达了Hp HspA编码基因，为HspA蛋白质疫苗的研制和快速诊断试剂盒的开发奠定了良好的基础。
【关键词】 幽门螺杆菌；热休克蛋白A；重组载体；基因表达
文章编号：1003-1383(2007)06-0666-03中图分类号：R 392-33文献标识码：A
幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，Hp)是上消化道疾病的主要致病菌，在人群中的感染率极高，我国普通人群的感染率为50%～80%，每年新增感染人数近千万[1]。Hp不仅是导致慢性胃炎、消化性溃疡及胃癌、胃黏膜相关性淋巴组织(MALT)淋巴瘤等胃部疾病的主要致病细菌，而且与肠道外疾病的发生也有显著的作用，故已被世界卫生组织国际癌症研究机构列入第一类致癌原[2~4]。根据Hp的感染，临床上多采用复合抗生素疗法，虽然可以达到一定的效果，但却存在再次感染、诱导耐药菌株流行、药物副作用和费用较高等问题，且不能达到预防Hp感染的目的。因此，发展Hp疫苗是预防Hp感染最有效、最有前景的方法。Hp的致病性包括它的动力、黏附力、尿素酶、磷脂酶A、热休克蛋白和毒素等，其中HspA为所有的Hp共同的抗原成分，可刺激机体产生保护性免疫反应。本研究采用基因克隆技术，构建了含HspA基因的重组质粒，并在E.coli中进行表达,为Hp疫苗的研制奠定了基础 ......
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