丹参多酚酸盐对大鼠脑缺血再灌注过氧化损伤的保护作用(2)
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3.神经功能缺损评分 各组动物于苏醒后6 h内按照Zea Longa和Bederson的方法进行评分，0分：无神经缺损症状；1分：右前肢不能完全伸直；2分：向右侧旋转；3分：向右侧倾倒；4分：不能自己行走或昏迷。评分为0分、有呼吸困难、提前死亡及处死后发现有蛛网膜下腔出血的均弃之不用，手术中出血过多的大鼠亦予以剔除，并均在后续实验中补足。建模成功大鼠缺血后24 h再次评分，将此分数录入实验结果。
4.脑梗死体积的测定 每组随机选择6只大鼠，适时断头取脑，弃去嗅球、小脑及低位脑干。置-20℃冰箱中冷冻20 min，距额极3 mm开始切片，每片厚2 mm，放入1%TTC水溶液中，37℃孵育30 min。缺血区染成白色，有正常血供的脑组织为红色。染色后以10%甲醛溶液避光保存24小时，数码相机拍照后，应用病理图像分析仪测定梗死面积，根据公式V=(A1+…+An)t/2算出梗死体积，其中t为切片厚度，A为梗死面积。
5.指标测定 大鼠戊巴比妥钠麻醉后断头处死，冰盘上快速取左侧额顶叶背外侧区皮质，精确称重后用预冷的匀浆介质制成10%脑匀浆。低温高速离心15 min，取上清-70℃冰箱保存。严格按照试剂盒说明进行SOD、GSHPx活性及MDA含量测定。
6.统计学分析 结果用均数±标准差(-±s)表示，采用SPSS12.0统计软件包，以单因素方差分析和t检验作差异的显著性分析。P<0.05表示有统计学意义。
结果
1.行为学评分 与缺血再灌注组比较，丹参多酚酸盐可以明显降低实验大鼠的行为学评分，且高剂量组降低程度较低剂量组更为显著(P<0.05)。见表1。
2.脑梗死体积 与缺血再灌注组比较，丹参多酚酸盐可以明显减少实验大鼠的脑梗死体积，且高剂量组较低剂量组更为显著 (P<0.05)。见表1。
3.丹参多酚酸盐对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织SOD、GSHPx和MDA的影响缺血再灌注后脑组织内SOD及GSHPx活性降低，MDA含量明显升高；丹参多酚酸盐可提高SOD及GSHPx活性，降低MDA含量，且高剂量组与低剂量组间有显著性差异 (P<0.05)。见表2。
讨论
缺血性脑血管病是临床常见的致死性疾病之一，对人类健康危害极大。脑缺血再灌注损伤的病理生理机制非常复杂，再灌注期产生的大量自由基导致的过氧化反应已被证实参与了脑损伤的发生。自由基是带有不成对自由电子的化学基团，性质异常活跃，易与脂质、蛋白质、核酸发生一系列过氧化反应。其既可通过损伤大分子物质导致缺血性脑损伤，也能通过信号转导途径损伤脑组织。SOD和GSHPx是细胞内两种主要的抗氧化酶，可增加自由基的清除，它们是体内自由基平衡的酶性调节剂，可调动或激活机体中的内源性抗氧化系统，有利于预防或减轻自由基损伤，也是较敏感并能反映细胞抗氧化能力的观察指标。MDA是氧自由基攻击生物膜中的多不饱和脂肪酸引发脂质过氧化作用而形成的脂质过氧化物，它的量反映了体内脂质过氧化的程度，间接地反映出细胞损伤程度。
研究证实，减少自由基的产生或增强清除自由基的能力，能产生脑保护作用[5]。本研究显示丹参多酚酸盐使SOD和GSHPx活性的下降趋势得到了明显改善，脑组织中SOD和GSHPx的活性增加，同时MDA的含量也明显降低。说明丹参多酚酸盐能改善机体氧自由基生成与清除之间的动态平衡，增强机体的抗氧化能力，一方面增强了脑组织清除氧自由基的能力，同时也能减轻MDA引起的损伤，这是其发挥缺血脑保护作用的机制之一。
丹参多酚酸盐能提升组织中SOD 和GSHPx的活性的具体机制尚不清楚，但可能与其能清除体内自由基有关。有研究发现静脉应用丹参后，左半结肠癌切除术后患者血中SOD活性明显上升，同时自由基含量也明显减少[6]。王舒平等[7]证实了丹酚酸能清除实验小鼠体内自由基。自由基被清除后，SOD和GSHPx的消耗大大减低，从而间接提高了SOD和GSHPx的活性，增强了脑组织抗自由基损伤的能力，发挥脑保护作用。
参考文献
[1]刘艾林，李铭源，王一涛，等.丹参药理学活性物质基础研究现状[J].中国药学杂志，2007，42(9):641-646.
[2]蒋玉凤，王秋华，刘志勤，等.丹酚酸B对缺血小鼠脑能量代谢和脑水肿的影响[J]. 中国病理生理杂志，2007，23(12):2300-2303.
[3]Longa EZ， WeinsteinPR， Carlson S，et al.Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats[J]. Stroke，1989，20(1):84-91.
[4]杨 涛，刘 勇，常燕群.线栓法制备大鼠局灶性脑缺血模型的改进及评价[J] ......
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