鸡胚地龙膏对兔急性软组织损伤血清及组织液中疼痛指标的影响(2)
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参见附件(4470KB，9页)。
Conclusion Jipei ointment can effectively reduce the levels of PGE2，5-HT，HIS and other pain indexes in blood and tissue fluid of rabbits with acute soft tissue injury. It can relieve pain of injury.
【Key words】Acute soft tissue damage;Pain index;Jipei ointment; New Zealand Rabbits
急性软组织损伤是骨伤科临床常见病、多发病，临床主要表现为局部肿胀、疼痛、功能障碍、青紫瘀斑等。鸡胚地龙膏是胡建山教授运用水医药独特理论研制并获得国家专利，在临床上广泛应用于治疗急性软组织损伤的外用药剂，具有明显的抗炎及活血化瘀、消肿止痛的功效[1]。本研究对兔急性软组织损伤后血清及组织液中疼痛因子进行检测，旨在探讨鸡胚地龙膏的镇痛机理，为鸡胚地龙膏治疗急性软组织损伤后的临床应用提供理论依据。
材料与方法
1.实验药物 ①鸡胚地龙膏：由锡生藤、骨碎补、五加皮等15味中药组成。规格: 7.5 cm×7.5 cm，由贵州省黔南州中医医院制剂室提供。②奇正消痛膏:主要由独一味、棘豆、姜黄、水柏枝等组成，由西藏奇正藏药集团提供，国药准字Z54020113。
2.动模及分组 105只新西兰白兔(贵阳医学院动物实验中心提供)，成年雄性，体重(2.5±0.39)kg，月龄3个半月。每天0.2 kg兔配合饲料喂养(饲料由东方希望集团生产)，自由饮水。适应性饲养5天后，随机选出21只为正常对照组，剩余84只新西兰白兔制作左后腿部急性软组织损伤模型[2]，造模成功后随机分为4组，分别为模型对照组、阳性药物组、鸡胚地龙膏低剂量组和鸡胚地龙膏高剂量组，每组21只动物。模型组不作处理，自然恢复，阳性药物组采用奇正消痛膏治疗(0.75 g/kg)，鸡胚地龙膏低剂量组和鸡胚地龙膏高剂量组采用鸡胚地龙膏治疗，药物剂量分别为0.15 g/kg和0.75 g/kg。阳性药物组、鸡胚地龙膏低剂量组和鸡胚地龙膏高剂量组药膏涂布面积以超过受损区面积1/2 以上为度，外用特制胶布及卫生胶布固定、包扎，每天换药1次，共给药8天。五组的饲养条件、饲养环境相同。
3.血液标本采集 五组实验动物分别于损伤前24小时、伤后即刻、药物治疗后第1、2、3、6、8天每组随机选取3只进行血液标本采集，抽血时间在清晨8:00兔进食前，抽血部位为兔耳中动脉，每只动物采血5 ml。各组所抽的血液标本放于洁净试管中，避光静置4小时后于2 000 r/min离心15分钟。然后将血清分装于0.5 ml的EP管中，放置于-20℃的低温冰箱中保存备用。
4.组织液制备 各组动物采血完成后，处死动物，模型组、阳性药物组、鸡胚地龙膏低剂量组和鸡胚地龙膏高剂量四组用手术刀切开兔受打击部位皮肤，分离皮下组织，切取受打击部位中心呈青紫色的肌肉组织(筋膜组织)，用生理盐水漂洗1 min，滤纸吸干，分析天平称取(200±5)mg，每10 mg组织加入生理盐水0.5 ml，于匀浆器中缓慢而均匀地研磨15 min，至匀浆液呈均匀一致悬浊液，倒入试管中在高速冷冻离心机以2 500 r/min离心15 min，收集上清液，置于-20℃冰箱中备用；正常对照组取正常组织，制备方法与上述相同。
5.疼痛相关指标观察 兔前列腺素E2(PGE2)、5-羟色胺(5-HT) 和组织胺(HIS)试剂盒(试由上海信然实业有限公司司提供，进口分装)。采用Rayto-RT6100酶标仪法测定(ELISA法)，操作步骤按说明书进行。
6.统计学处理 采用SPSS13.00软件处理，所有数据采用(-±s)表示，组间比较采用t检验，P<0.05有统计学意义。
结果
1.各组实验动物血清及组织液中PGE2含量变化比较 损伤前，5组实验兔血清及组织液中PGE2基础值差异无统计学意义(P>0.05)；兔急性软组织损伤后即刻(0.5 h)模型组、阳性药物组、鸡胚地龙膏低剂量组及鸡胚地龙膏高剂量组4组血清及组织液中PGE2值均升高，各组之间比较差异无统计学意义(P>0.05)；损伤后第1天(24 h)，模型组、阳性药物组、鸡胚地龙膏低剂量组及鸡胚地龙膏高剂量组血清PGE2值继续升高，与对照组相比有统计学意义(P<0.01)，阳性药物组、鸡胚地龙膏低剂量组及高剂量组血清PGE2值与模型组比较，差异也有统计学意义(P<0.01)，说明两种治疗方法可以减少损伤后24小时内的PGE2的增高程度，对缓解兔急性骨软组织损伤后疼痛均有显著性效果(P<0.01)；损伤后第2天(48 h)，鸡胚地龙膏高剂量组PGE2值开始回落，与阳性药物组、鸡胚地龙膏低剂量组比较差异有统计学意义(P<0.01)，说明在损伤后第2天，鸡胚地龙膏高剂量组治疗方法对兔急性软组织损伤后疼痛的缓解继续有效；损伤后第3天(72 h)阳性药物组、鸡胚地龙膏低剂量两组PGE2值开始回落，而鸡胚地龙膏高剂量组PGE2值趋于正常。说明鸡胚地龙膏高剂量抑制外周PGE2的作用优于阳性药物组和鸡胚地龙膏低剂量组(P<0.01)；损伤后第8天，模型组、阳性药物组、鸡胚地龙膏低剂量组及鸡胚地龙膏高剂量组PGE2值均接近基础值，差异无统计学意义(P>0.05)，说明损伤的急性期已经过去(愈合)，机体疼痛、肿胀已不明显(康复)。见表1、表2。
2.各组实验动物血清及组织液中5-HT含量变化比较 损伤前，5组实验兔血清及组织液中5-HT基础值差异无统计学意义(P>0.05)；兔急性软组织损伤后即刻(0.5 h)模型组、阳性药物组、鸡胚地龙膏低剂量组及鸡胚地龙膏高剂量组4组血清及组织液中5-HT值均升高，各组之间比较差异无统计学意义 (P>0.05)；损伤后第1天(24 h)，模型组、阳性药物组、鸡胚地龙膏低剂量组及鸡胚地龙膏高剂量组血清5-HT值继续升高，与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01)，阳性药物组、鸡胚地龙膏低剂量组及鸡胚地龙膏高剂量组血清5-HT值与模型组比较，差异有统计学意义(P<0.01)；损伤后第2天(48 h) 鸡胚地龙膏高剂量组5-HT值开始回落，与阳性药物组及鸡胚地龙膏低剂量组比较 ......
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