广西野生高良姜提取液抗菌作用研究
【关键词】 高良姜；提取液；抗菌作用
中图分类号：R285.1 文献标识码：B DOI：10.3969/j.issn.10031383.2015.05.032
近年来，随着合成及半合成抗菌药物的增多和广泛使用，细菌耐药性问题日趋严重，各种耐药性细菌引发院内感染等疾病的发病率不断增长，长期以来西药对耐药一直束手无策[1]。高良姜(Alpinia officinarumHance)性辛、热，归脾、胃经，具有温胃、止呕、散寒止痛之功效[2]，现代药理学研究表明，高良姜还具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤、抗氧化、抗胃肠道出血、抗溃疡和胃黏膜保护等作用[3]。本研究利用野生高良姜提取液，研究其抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的情况，为高良姜的抗菌作用提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 菌种的收集
本次实验收集2014年5月～2015年4月右江民族医学院附属医院从临床分离的菌株，采集的标本来自临床感染患者咽拭子、痰、气管冲洗物、血液、脓液、粪便等标本。所有菌株经VITEK微生物分析仪鉴定确认。收集到的金黄色葡萄球菌25株，绿脓杆菌15株，白色念珠菌16株，不动杆菌15株，大肠杆菌12株。
1.2 药物
本试验所用高良姜来自广西百色周边的山地，经乙醇提取后使用。
1.3 高良姜药液的制备
高良姜水提液的提取：高良姜切成碎片后加水，用10倍的水煎煮3次，每次1小时，浓缩至1 g/ml。高良姜乙醇液提取：取高良姜碎片，用75%乙醇回流提取3次，每次1小时，浓缩至1 g/ml。上述药液都配制成0.5 g/ml，0.25 g/ml，0.125 g/ml，0.0625 g/ml四种浓度备用。
1.4 KB药敏纸片法
将纯培养后的菌种接种于普通培养基中，37℃培养24 h，用接种环挑取形态相似菌落4～5个，接种于5 ml的MH肉汤中，37℃培养3 h，用生理盐水配制成0.5麦氏/比浊标准，即含1～2108 CFU/ml的菌悬液。无菌操作下将空白药敏纸片(6 mm)放到不同浓度的高良姜药液中，浸泡1 h。用棉签取上述菌悬液涂布到MH平板中，再将含有药样的药敏纸片滤水，微干后铺在平板中，37℃培养24 h后观察结果。
1.5 琼脂稀释法测最低抑菌浓度(MIC)
采用美国CLS标准琼脂稀释法测定各种中药提取液对所采集菌种的最低抑菌浓度(minimum inbibition concentration，MIC)[4]。本次实验高良姜测定浓度范围为1～4 g/ml。各浓度的高良姜分别加入经过高压灭菌后在50℃水浴的MH琼脂中，充分混匀后倾倒入平皿，琼脂厚度为5～6 mm。制备浓度相当于0.5麦氏标准比浊管的菌悬液，再以1∶10稀释，用微量移液器吸取制备好的菌液2 μL接种于琼脂平板表面，每点菌数约为104 CFU，形成5～8 mm的菌斑。接种好后置37℃培养箱24 h后将平板置于暗色、无反光的物体表面判断结果，以抑制细菌生长的最低药物浓度为MIC。
2 结 果
2.1 KB药敏纸片法检测高良姜提取液的抗菌作用
结果显示：高良姜醇提液和水提液对金黄色葡萄球菌均敏感，对铜绿假单胞菌、白假丝酵母菌、不动杆菌、大肠埃希菌不敏感。见表1。
2.2 琼脂稀释法检测结果
高良姜醇提液和水提液浓度为0.0625 g/ml，0.125 g/ml，0.25 g/ml时对金黄色葡萄球菌均耐药，浓度为0.5 g/ml时对金黄色葡萄球菌均敏感，结果表明，高良姜醇提液和水提液对金黄色葡萄球菌的MIC均为0.5 g/ml。
3 讨 论
高良姜，别名小良姜，又名徐闻良姜，药学名Alpiniaofficinarum Hance，为姜科植物，是一种热带多年生长的山姜，属食药兼用的植物资源。追溯高良姜的历史，高良姜始载于《名医别录》，因出于古高凉郡(今广东省湛江、茂名一带)故名高凉姜，后因谐音而讹称为高良姜。高良姜在我国古代的诸多药典如《本草纲目》及《中国药典》均有记载。而在《图经本草》中则对高良姜有更详细的记载：“春生茎叶如姜苗而大，高一、二尺许，花红紫色如山姜”。高良姜对人体造血机能有显著促进作用，据《本草纲目》记载，“其性甘辣、清凉，除烦热、利津小便，通三焦团壅、塞气抗寒、散气之功效，且明目驱瘴。”其味辛，性温，有温胃散寒、行气、消食止痛之功效[5～7]。
近20年来，随着合成及半合成抗菌药物的增多和广泛使用，细菌耐药性问题日趋严重，各种耐药性细菌引发院内感染等现象不断增多，长期以来西药对此一直束手无策，而高良姜是研究开发新的抗菌药物的理想资源，但目前有关研究较少，并且还仅仅处于对粗提物的研究阶段，为明确其中的活性成分，有待进一步深入研究[8～10]。
本实验用广西野生的高良姜提取液，研究其对金黄色葡萄球菌等五种菌的抗菌作用，为中药治疗临床常见细菌感染提供新的思路，研究结果显示：高良姜提取液对金黄色葡萄球菌有很好的抑菌作用，对铜绿假单胞菌、白假丝酵母菌、不动杆菌、大肠埃希菌无抑菌作用。下一步研究将进一步提取高良姜提取液中的各有效成分，研究其抗菌作用。本研究为高良姜的抗菌作用提供理论依据，也为以后进一步深入研究开发广西野生高良姜这一宝贵中药资源奠定研究基础。
参 考 文 献
[1] 黄慧珍，杨 丹.高良姜的化学成分及其药理活性研究进展[J].广东化工，2009，36(1)：7780.
[2] 严 波，白筱璐，胡竟一，等.高良姜的解热和抗炎作用[J].中药药理与临床， 2013，29(1)：8587.
[3] 王丽峰，彭敬东，王 宁.高良姜药材高效液相指纹图谱研究[J].西南师范大学学报，2008，33(6)：3338.
[4] 赵 炯，吕 玮，段宏泉，等.高良姜中的抗白念珠菌化学成分[J].山西医科大学学报，2007，38(7)：604606.
[5] 吕 玮，蒋伶活.高良姜的化学成分及药理作用[J].中国药业，2006，15(3)：1921.
[6] 庞启华，严 萍，赵 翾，等.南药高良姜基因组DNA提取方法的研究[J].时珍国医国药，2008，19(5)：11871189.
[7] 霍仕霞，康雨彤，彭晓明，等.高良姜提取物促进黑素生成的谱效关系分析[J].中草药，2013，44(8)：9951002.
[8] 康爱荣，闫 明，彭 英，等.高良姜中高良姜素的醇提和纯化工艺研究[J].中国中医药信息杂志，2011，5(18)：4446.
[9] 霍仕霞，彭晓明，高 莉，等.不同质量分数高良姜素对人黑色素瘤A375细胞黑素合成及相关基因表达的影响[J].中草药，2014，45(2)：244249.
[10] 许云霞，赵新淮.高良姜素对人胃癌SGC7901细胞增殖、周期循环和凋亡的体外影响[J].中国药学杂志，2013，48(15)：12741278.
(收稿日期：2015-09-09 修回日期：2015-10-22)
(编辑：潘明志) (覃艳春等)
中图分类号：R285.1 文献标识码：B DOI：10.3969/j.issn.10031383.2015.05.032
近年来，随着合成及半合成抗菌药物的增多和广泛使用，细菌耐药性问题日趋严重，各种耐药性细菌引发院内感染等疾病的发病率不断增长，长期以来西药对耐药一直束手无策[1]。高良姜(Alpinia officinarumHance)性辛、热，归脾、胃经，具有温胃、止呕、散寒止痛之功效[2]，现代药理学研究表明，高良姜还具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤、抗氧化、抗胃肠道出血、抗溃疡和胃黏膜保护等作用[3]。本研究利用野生高良姜提取液，研究其抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的情况，为高良姜的抗菌作用提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 菌种的收集
本次实验收集2014年5月～2015年4月右江民族医学院附属医院从临床分离的菌株，采集的标本来自临床感染患者咽拭子、痰、气管冲洗物、血液、脓液、粪便等标本。所有菌株经VITEK微生物分析仪鉴定确认。收集到的金黄色葡萄球菌25株，绿脓杆菌15株，白色念珠菌16株，不动杆菌15株，大肠杆菌12株。
1.2 药物
本试验所用高良姜来自广西百色周边的山地，经乙醇提取后使用。
1.3 高良姜药液的制备
高良姜水提液的提取：高良姜切成碎片后加水，用10倍的水煎煮3次，每次1小时，浓缩至1 g/ml。高良姜乙醇液提取：取高良姜碎片，用75%乙醇回流提取3次，每次1小时，浓缩至1 g/ml。上述药液都配制成0.5 g/ml，0.25 g/ml，0.125 g/ml，0.0625 g/ml四种浓度备用。
1.4 KB药敏纸片法
将纯培养后的菌种接种于普通培养基中，37℃培养24 h，用接种环挑取形态相似菌落4～5个，接种于5 ml的MH肉汤中，37℃培养3 h，用生理盐水配制成0.5麦氏/比浊标准，即含1～2108 CFU/ml的菌悬液。无菌操作下将空白药敏纸片(6 mm)放到不同浓度的高良姜药液中，浸泡1 h。用棉签取上述菌悬液涂布到MH平板中，再将含有药样的药敏纸片滤水，微干后铺在平板中，37℃培养24 h后观察结果。
1.5 琼脂稀释法测最低抑菌浓度(MIC)
采用美国CLS标准琼脂稀释法测定各种中药提取液对所采集菌种的最低抑菌浓度(minimum inbibition concentration，MIC)[4]。本次实验高良姜测定浓度范围为1～4 g/ml。各浓度的高良姜分别加入经过高压灭菌后在50℃水浴的MH琼脂中，充分混匀后倾倒入平皿，琼脂厚度为5～6 mm。制备浓度相当于0.5麦氏标准比浊管的菌悬液，再以1∶10稀释，用微量移液器吸取制备好的菌液2 μL接种于琼脂平板表面，每点菌数约为104 CFU，形成5～8 mm的菌斑。接种好后置37℃培养箱24 h后将平板置于暗色、无反光的物体表面判断结果，以抑制细菌生长的最低药物浓度为MIC。
2 结 果
2.1 KB药敏纸片法检测高良姜提取液的抗菌作用
结果显示：高良姜醇提液和水提液对金黄色葡萄球菌均敏感，对铜绿假单胞菌、白假丝酵母菌、不动杆菌、大肠埃希菌不敏感。见表1。
2.2 琼脂稀释法检测结果
高良姜醇提液和水提液浓度为0.0625 g/ml，0.125 g/ml，0.25 g/ml时对金黄色葡萄球菌均耐药，浓度为0.5 g/ml时对金黄色葡萄球菌均敏感，结果表明，高良姜醇提液和水提液对金黄色葡萄球菌的MIC均为0.5 g/ml。
3 讨 论
高良姜，别名小良姜，又名徐闻良姜，药学名Alpiniaofficinarum Hance，为姜科植物，是一种热带多年生长的山姜，属食药兼用的植物资源。追溯高良姜的历史，高良姜始载于《名医别录》，因出于古高凉郡(今广东省湛江、茂名一带)故名高凉姜，后因谐音而讹称为高良姜。高良姜在我国古代的诸多药典如《本草纲目》及《中国药典》均有记载。而在《图经本草》中则对高良姜有更详细的记载：“春生茎叶如姜苗而大，高一、二尺许，花红紫色如山姜”。高良姜对人体造血机能有显著促进作用，据《本草纲目》记载，“其性甘辣、清凉，除烦热、利津小便，通三焦团壅、塞气抗寒、散气之功效，且明目驱瘴。”其味辛，性温，有温胃散寒、行气、消食止痛之功效[5～7]。
近20年来，随着合成及半合成抗菌药物的增多和广泛使用，细菌耐药性问题日趋严重，各种耐药性细菌引发院内感染等现象不断增多，长期以来西药对此一直束手无策，而高良姜是研究开发新的抗菌药物的理想资源，但目前有关研究较少，并且还仅仅处于对粗提物的研究阶段，为明确其中的活性成分，有待进一步深入研究[8～10]。
本实验用广西野生的高良姜提取液，研究其对金黄色葡萄球菌等五种菌的抗菌作用，为中药治疗临床常见细菌感染提供新的思路，研究结果显示：高良姜提取液对金黄色葡萄球菌有很好的抑菌作用，对铜绿假单胞菌、白假丝酵母菌、不动杆菌、大肠埃希菌无抑菌作用。下一步研究将进一步提取高良姜提取液中的各有效成分，研究其抗菌作用。本研究为高良姜的抗菌作用提供理论依据，也为以后进一步深入研究开发广西野生高良姜这一宝贵中药资源奠定研究基础。
参 考 文 献
[1] 黄慧珍，杨 丹.高良姜的化学成分及其药理活性研究进展[J].广东化工，2009，36(1)：7780.
[2] 严 波，白筱璐，胡竟一，等.高良姜的解热和抗炎作用[J].中药药理与临床， 2013，29(1)：8587.
[3] 王丽峰，彭敬东，王 宁.高良姜药材高效液相指纹图谱研究[J].西南师范大学学报，2008，33(6)：3338.
[4] 赵 炯，吕 玮，段宏泉，等.高良姜中的抗白念珠菌化学成分[J].山西医科大学学报，2007，38(7)：604606.
[5] 吕 玮，蒋伶活.高良姜的化学成分及药理作用[J].中国药业，2006，15(3)：1921.
[6] 庞启华，严 萍，赵 翾，等.南药高良姜基因组DNA提取方法的研究[J].时珍国医国药，2008，19(5)：11871189.
[7] 霍仕霞，康雨彤，彭晓明，等.高良姜提取物促进黑素生成的谱效关系分析[J].中草药，2013，44(8)：9951002.
[8] 康爱荣，闫 明，彭 英，等.高良姜中高良姜素的醇提和纯化工艺研究[J].中国中医药信息杂志，2011，5(18)：4446.
[9] 霍仕霞，彭晓明，高 莉，等.不同质量分数高良姜素对人黑色素瘤A375细胞黑素合成及相关基因表达的影响[J].中草药，2014，45(2)：244249.
[10] 许云霞，赵新淮.高良姜素对人胃癌SGC7901细胞增殖、周期循环和凋亡的体外影响[J].中国药学杂志，2013，48(15)：12741278.
(收稿日期：2015-09-09 修回日期：2015-10-22)
(编辑：潘明志) (覃艳春等)