1.2试剂及方法

    E选择素单克隆抗体购于R&D Systems公司，二抗、DAB 染色剂购于北京中杉金桥生物技术有限公司。采用免疫组化En Vision两步法检测，其主要操作步骤：(1)石蜡切片，脱蜡至水。(2)抗原修复，采用枸橼酸缓冲液高压抗原修复，高压锅喷气2 min，放置冷却至室温。(3)3%H2O2室温孵育10 min阻断内源性过氧化酶活性。(4)切片滴加非免疫牛血清室温下存放10 min，以封闭非特异性抗原反应。(5)滴加 25 mg/L鼠抗人E选择素单克隆抗体，4 ℃下孵育过夜，然后用PBS缓冲液冲洗3次，每次3 min。(6)每张切片滴加二抗多聚复合物，室温下孵育15 min，PBS冲洗3次，每次3 min。(7)DAB显色、苏木素复染及中性树脂封片。用已知阳性切片作阳性对照，以0.1 mol/L PBS代替一抗作为阴性对照。

    1.3结果判断

    光镜下组织细胞结构清晰，在细胞胞浆、胞膜中出现棕黄色颗粒，且染色明显高于背景，判读为阳性。根据病变区域阳性细胞所占百分比记分：随机选取5个高倍视野，分别计数100个细胞，阳性细胞计数26%～50%记为1分，51%～75%记为2分，>75%记为3分。根据病变区域的普通染色强度记分：1分：无着色或淡黄色；2分：棕黄色；3分：明显着色为棕褐色。综合细胞着色强度及阳性细胞数判定阳性强度和阳性率，取两项评分的乘积为最终综合评分 ......