兔骨髓间充质干细胞的体外培养、鉴定与生物学特性观察
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【摘要】目的：探讨兔骨髓间充质干细胞体外分离、培养和鉴定，观察其生物学特性。方法：采集兔股骨、胫骨、肱骨骨髓组织，采用密度梯度离心法和细胞贴壁培养法净化和提纯骨髓间充质干细胞，通过体外培养、分离和扩增，倒置相差显微镜观察细胞形态，流式细胞术检测细胞表面标记物，观察细胞生物学特性。结果：兔骨髓间充质干细胞形态呈梭形、纺锤形，旋涡状生长排列，增值活跃。细胞表面标记物CD44分子阳性，CD34分子阴性。结论：成功建立了兔BMSCs体外培养、分离和扩增的试验方法，从而证明骨髓间充质干细胞是理想的组织工程种子细胞。
【关键词】骨髓间充质干细胞；细胞培养；细胞鉴定
【中图分类号】R392.4【文献标识码】A【文章编号】1044-5511(2011)11-0346-02
骨髓间充质干细胞(bone marrow-drived mes-enchymal stem cells,BMSCs是来源于骨髓的 MSCs，具有采集方便的优点，是理想的组织工程种子细胞[1]具有多向分化和自我复制潜能,易于自体采集、无免疫排斥反应、避免伦理学限制等优点,在细胞治疗方面得到了广泛的应用。但是BMSCs在骨髓微环境中所占比例极少,使用何种简单操作方法快速获取形态均一和纯度较高的BMSCs便成为该研究领域关注的焦点[2]。本实验采用全骨髓贴壁细胞培养法和密度梯度离心法相结合分离、纯化BMSCs，通过体外培养扩增，以及流式细胞术鉴定，建立稳定的BMSCs培养扩增方法。
1 材料与方法
1.1 实验动物：日本大耳白兔4只，4周龄，雌雄不限，体重250~300g，购于兰州生物制品研究所。
1.2 主要试剂及仪器：二氧化碳培养箱(BB16UV型,德国Heraeus公司)、超净工作台(VS-1300L型,苏净集团苏州安泰空气技术有限责任公司)、倒置相差显微镜、超声波清洗仪、纯净水系统、酸度计、台式高速离心机(北京科伟永鑫实验仪器设备厂)、低糖培养基(GBICO公司)、胎牛血清(杭州四季青)、谷氨酰胺、青链霉素、胰酶、流式细胞抗体(北京博奥森生物技术有限公司)。
1.3 兔BMSCs的采集： 取4周龄日本大耳白兔一只，雌雄不限，20ml空针空气栓子经耳缘静脉注入 ......
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