酸枣仁皂苷A为酸枣仁汤镇静催眠作HPLC—ELSD法测定酸枣仁汤(冻干)中酸枣仁皂苷A的含量
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[摘 要] 目的 建立中药复方酸枣仁汤(冻干)中酸枣仁皂苷A的含量测定方法。方法 应用高效液相色谱一蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)。色谱柱：Hypemil BDS-2 C18(250mm x4.6 mm，5µm)；流动相：乙腈一水(30：70)，流速1.0 ml/min。柱温25℃。结果 酸枣仁皂苷A在0.3624μg～6.0414μg范围内与峰面积的对数值呈良好的线性关系，线性方程为y=1.4643X+2.8084，r=0.9997 (n=6)，平均回收率为97.54%。结论 该法可靠、重现性好，可作为酸枣仁汤(冻干)的质量控制方法。
关键词：酸枣仁汤(冻干) 酸枣仁皂苷A 含量测定 HPLC—ELSD
中图分类号：R289 文献标识码：B 文章编号：1004-7484(2010)11-0046-02
酸枣仁具有很好的镇静催眠作用，中药复方酸枣仁汤临床上常用于治疗神经系统和心血管系统疾病，对顽固性失眠有显著疗效[1]。据文献报道，酸枣仁汤中君药酸枣仁镇静催眠的主要有效成分为酸枣仁皂苷A、B[2]。本项研究以酸枣仁皂苷A为指标建立了酸枣仁汤(冻干)的含量测定方法.为酸枣仁汤开发研究新制剂制定质量标准提供了参考。
1 材料与仪器
1.1 仪器与材料 Agilent 1100 series高效液相色谱仪，CML-100柱温箱，Agilent 1100 单元泵，35900E转换器，SEDEX-85蒸发光散射器，Agilent色谱工作站，METTLER XS205电子天平(瑞典)，KQ250型超声波清洗器(昆山市超声波仪器厂)，酸枣仁皂苷对照品购自中国药品生物制品检定所；甲醇、乙腈为色谱纯(Dikma Pure)，水为二次重蒸水；
1.2 试药 酸枣仁汤(冻干)为哈药集团中药二厂研发中心提供。
2 试验方法与结果
2.1 色谱及检测条件
色谱柱：Hypersil 150×4.6mm 5µ BDS C18；流动相：乙腈：水(30：70)；流速：l ml/min；柱温：25℃；ELSD气化室温：40℃。
2.2 对照品溶液的制备 精密称取酸枣仁皂苷A对照品适量于50ml量瓶中，加甲醇制成每1 mL含0.4 mg的溶液，作为对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备 取本品1g，精密称定，加入水10ml溶解，通过AB8型大孔吸附树脂柱(内径1cm，长15cm)，以水洗脱至无色，弃去水液，再用80%乙醇50ml洗脱，收集洗脱液，浓缩至2～3ml，转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。
2.4 阴性干扰试验：在选定条件下测得的阴性液吸收曲线在与酸枣仁皂苷A相同保留时间处不存在吸收峰，因此说明选定的条件测定酸枣仁皂苷A无干扰，具有较强的专属性。
2.5 线性关系的考察
精密称取酸枣仁皂苷A对照品适量于50ml量瓶中，加甲醇制成每1 mL含0.4 mg的溶液，作为对照品溶液。从对照品浓溶液中精密吸取3.7、2.5、1.8、1.3ml于5ml 量瓶中，以甲醇定容至刻度，即为对照品溶液1～4号，再从对照品溶液1中精密吸取0.8、0.3ml于5ml 量瓶中，以甲醇定容至刻度，即为对照品溶液5、6号。分别吸取对照品溶液(1～6号)20μl，进样测定。按含量测定方法测定峰面积，并以峰面积的对数值为纵坐标，对照品进样量对数值为横坐标建立标准曲线，得回归方程为：Y=1.4643X+2.8084(r=0.9997)，酸枣仁皂苷A在0.3624～6.0414μg范围内呈良好的线性关系。
2.6 精密度察
取同一浓度对照品溶液，重复进样6次，进样量20μl，峰面积对数值的平均值为3.6066，RSD为0.515%。结果表明，仪器精密度良好。
2.7 稳定性试验 取供试品溶液，于0、0.5、1、3、4、24 h分别进样测定。结果表明，酸枣仁皂苷A色谱峰面积对数值的平均值为0.5795，RSD为1.74%(n=6)。表明供试品溶液在24 h内基本稳定。
2.8 重现性试验 取同一批供试品6份，照样品测定方法处理并测定。结果表明，酸枣仁皂苷A平均含量为0.6258 mg/g，RSD为1.42%(n=6)。表明该方法重现性良好。
2.9 加样回收率试验 取已知含量的供试品(酸枣仁皂苷A含量为0.6258mg/g )6份，每份约0.5 g，精密称定，加入一定量的酸枣仁皂苷A对照品，按“2.3”项下操作，在上述色谱条件下进行分析。结果表明，酸枣仁皂苷A平均加样回收率为97 ......
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