基质金属蛋白酶及其抑制物在宫颈癌表达的意义(1)
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[摘 要] 目的 基质蛋白酶-2(MMP-2)及其抑制物(TIMP-2)是肿瘤浸润和转移的重要调节蛋白，寻找它们与宫颈上皮内瘤变和宫颈癌及其预后的关系。方法 采用免疫组织化学SP法检测75例早期宫颈浸润癌(宫颈癌组)、76例宫颈上皮内瘤样病变(CIN 组)中MMP-2和TIMP-2的表达情况。结果 MMP-2含量随着CIN分级的增加而增加，在CIN到浸润癌的过程中逐渐增加，有统计学差异(P<0.05)。TIMP-2含量从宫颈上皮内瘤变到宫颈癌逐渐减少，因此MMP-2/ TIMP-2的比值是逐渐增大的。结论 MMP - 2、TIMP - 2 的表达与宫颈癌的侵袭转移有关，MMP-2和TlMP-2的表达程度及MMP-2/TlMP-2的比值与宫颈癌的转移和预后密切相关，可作为判断宫颈癌侵袭转移和预后的指标。
关键词：MMP-2 TIMP-2 子宫颈癌 CIN
中图分类号：R711.74 文献标识码：B文章编号：1004-7484(2010)11-0058-03
宫颈癌是世界上第二种最常见的妇科恶性肿瘤，浸润性宫颈癌是妇科肿瘤患者死亡的主要原因，每年全球大约有50万人被诊断为宫颈癌，80%新发病例和大多数死亡患者来自包括中国在内的发展中国家[1]。肿瘤侵袭转移涉及到肿瘤细胞与宿主细胞的粘附性、肿瘤细胞的运动、细胞外基质的降解等过程。其中细胞外基质的降解是肿瘤细胞侵袭转移的前提。从上皮内瘤变到浸润性癌的过程，肿瘤细胞必须穿透基底膜，并降解细胞外基质[2]。基质金属蛋白酶(matrixmetallo- proteinase，MMPs)是一个蛋白水解酶家族，可降解细胞外基质成分，最近认为在肿瘤浸润和转移中发挥重要作用[3-6]。为探讨宫颈癌患者基质金属蛋白酶-2 (MMP-2)与基质金属蛋白酶组织抑制因子-2(TIMP-2)的表达情况，为宫颈癌的诊断、治疗及预后判断提供参考依据，我们进行了相关研究。
1 材料与方法
1.1 材料
自2008年8月～2009年11月，我们共收集134例标本，均为住院行手术治疗的患者，其中宫颈癌102例，正常宫颈组织22例。102例宫颈癌中，鳞癌84例，腺癌18例；年龄30～73 岁，中位年龄51岁； I 期62例、Ⅱ期40例，临床分期采用国际妇产科联盟(FIGO) 1995年修订的临床分期标准，伴淋巴结转移28例；组织学分级：Ⅰ级28例、Ⅱ级64 例、Ⅲ级10例；术前均未行抗肿瘤治疗。
1.2 主要试剂及方法
MMP-2、TIMP-2 均为鼠抗人单克隆抗体，分别购自北京中山生物公司、福州迈新生物公司。免疫组化采用S - P 法，用PBS 代替一抗作阴性对照，以已知阳性片作阳性对照。
1.3 判断标准
镜下观察肿瘤细胞，以胞浆出现棕黄色颗粒为阳性信号。高倍镜下取4个不同高倍视野，各计数100个细胞，按阳性细胞所占的百分率分为(-)～(+++)4个等级：无阳性细胞为阴性(-)，阳性细胞<10%为(+)、10 %～50 %为(++)、>50 %为(+++)；(+)～(+++)定为阳性表达，(-)定为阴性表达。
1.4 统计学方法
用SPSS 12.0统计软件进行处理，数据行 2检验和Spearman秩相关性检验。检验水准α=0.05。
2 结果
正常的宫颈上皮可发现TIMP阳性细胞，且仅限于上皮内，在基质TIMP表达阴性(见图1)。子宫颈癌组织中，我们可以发现MMP-2阳性细胞，大部分癌细胞的裸露的细胞核被MMP-2免疫组化染色的染色环包围，着色密度深浅不一(见图2)。高分化鳞癌的宫颈上皮可发现TIMP-2抗体，与正常上皮相比较，TIMP的表达显著减少，但并没有完全缺失(见图3)。
MMP与TIMP的表达与宫颈癌变的分级呈相关性(见表1和表2)，组织中MMP的密度与宫颈癌变的分级呈线性相关(P<0.001)，组织中TIMP的密度与宫颈癌的分级也呈负相关(P<0.05).随着宫颈癌分级的加重，MMP/TIMP的比率也加大。
3 讨论
肿瘤侵袭与转移是涉及肿瘤细胞与(extr- acellar matrix，ECM)之间相互作用的多步骤分子生物学变化过程[7]。肿瘤细胞与基底膜(BM)表面受体结合，释放各种水解酶降解ECM，瘤细胞伸出伪足向被蛋白酶降解的区域运动，在继发处形成转移灶。其中MMPs是重要的在多种肿瘤细胞中表达较高的降解ECM 的酶。有研究发现，在BM 未被降解和出现恶性病变时，肿瘤组织中已发现MMPs的表达上调并活化[8]。
宫颈癌是当前人类发病率和死亡率最高的恶性肿瘤之一，也是危害妇女的常见肿瘤，近年来的研究表明，基质金属蛋白酶及其抑制物与肿瘤的发生发展和转移有非常密切的关系。基质金属蛋白酶(mitrix metallopreinases，MMPs)及其抑制物(TIMP)与肿瘤侵袭转移的关系日益受到人们重视，已经成为肿瘤侵袭转移的研究热点[9]。基质蛋白酶组织抑制物(tissue inhibitor of metalloprotei- nases，TIMP)是MMP的天然抑制剂，TIMP与MMP之间的平衡关系在调节细胞外基质(ECM)稳态中有重要作用[10]，MMPs表达增强和(或)TIMPs表达降低可使MMPs的活性增强而致ECM和BM降解，进而促进肿瘤细胞的侵袭和转移[11]。
本实验结果表明，宫颈上皮内瘤变和宫颈癌的侵袭性不但与MMP-2表达增高有关，TIMP-2表达降低也是其具有侵袭性的重要原因。监测上述两项指标有助于指导宫颈癌的临床诊断和治疗。本实验还观察到在宫颈癌晚期MMP-2的表达比早期增高，而TIMP-2则相反，致使MMP-2/TIMP-2的比值增高，鉴于MMP-2/TIMP-2比例失衡与肿瘤的侵袭和转移及进程和预后有着密切的关系 ......
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