正交试验优选甘草黄酮和皂苷的提取工艺(2)
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参见附件(3107KB，4页)。
2.1.5 线性关系考察
分别取甘草苷对照品溶液0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 mL置10 mL容量瓶中，加10%KOH溶液1 mL，摇匀使之充分反应，反应时间为20 min，反应后加70%乙醇定容，摇匀，备用，在200～700 nm处进行全波长扫描，分别测定在402 nm和425 nm处的吸光度，结果为：吸收波长在402 nm时的标准曲线为：A=17.608C+0.0797(r=0.9986)；吸收波长在425 nm时的标准曲线为：A=13.881C+0.0664(r=0.9978)。从此结果来看，无论是402 nm还是425 nm，在0.0581～0.2905 mg范围内，线性关系皆良好。
2.1.6 加样回收率考察
取已知总黄酮含量的样品溶液2 mL，加入同量的甘草苷溶液1 mL，摇匀后测定总黄酮的量，平行制备5份，计算平均回收率为104.6%，RSD=2.1%(n=6)。
2.1.7 精密度考察
取同一供试品溶液，分别放置0，5，10，20，30，60 min，连续测定5次，结果为RSD = 1.80%。结论为仪器精密度良好。
2.1.8 重现性考察
精密称取同一供试品5份，依法测定，结果测得RSD = 0.97%。
2.2 甘草苷的含量测定
依据文献[1]进行。
方法学考察结果符合含量测定要求。
2.3 甘草酸的含量测定
依据文献[1]进行。
方法学考察结果符合含量测定要求。
2.4 提取工艺研究
2.4.1 正交试验方法
在预试验的基础上，根据单因素的考察结果，同时结合文献资料，以提取次数(A)，提取时间(B)，溶剂用量(C)，容积浓度(D)为考察因素，称取甘草饮片每份20g，共18份样品，按L9(34)正交表进行提取试验，以总黄酮、甘草苷和甘草酸含量为指标，进行检查。因素水平表见表1；正交试验结果见表2，表4，表6；方差分析结果见表3，表5，表7。
表1 因素水平表
水平ABCD
乙醇浓度提取次数提取时间t/h溶媒用量
130%10.510
260%21.515
390%32.520
表2 正交试验总黄酮含量结果分析
试验号因素总黄酮含量%
ABCD第一次第二次
111112.822.76
212223.543.6
313333.783.75
421233.363.42
522313.843.9
623123.843.72
731323.393.39
832132.942.88
933213.783.78
K13.1903.1603.4803.375
K23.4503.5803.5803.680
K33.7753.6753.3553.360
SS1.0310.9010.1520.391
SSE0.01665
dfe9
表3 正交试验总黄酮含量方差分析结果
方差来源SSdfS2FP结论
A0.11520.057278.z621<0.01显著
B0.10020.050243.594<0.01显著
C0.01720.00841.216>0.01无
D0.04320.022105.757<0.01显著
e0.0018590.000
注：F0.05(2,2)=19.00, F0.01(2,2)=99.00
表4 正交试验甘草苷含量结果分析
试验号因素甘草苷含量%
ABCD第一次第二次
111111.011.02
212221.551.54
313331.771.78
421231.361.36
522311.631.62
623121.621.63
731321.441.44
832131.181.18
933211.611.61
K11.2721.2731.4171.445
K21.4501.5051.5371.537
K31.6701.6131.4381.410
SS0 ......
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