高效液相色谱-蒸发光散射法测定消糖灵颗粒中黄芪甲苷的含量
http://www.100md.com
2010年8月1日
 |
| 第1页 |
参见附件(650KB，1页)。
【摘要】目的 建立消糖灵颗粒中黄芪的含量测定方法。方法 采用反相高效液相法进行黄芪中黄芪甲苷的含量测定,采用Kromasil C18色谱柱(200×4.6mm,5μ);以乙腈-水(32:68)为流动相,流速:1.0mL/min;柱温:40℃;采用蒸发光散射检测器:漂移管温度:105℃;载气流量:2.5L·min-1。结果 线性范围2.0-8.0μg,相关系数r=0.9995。平均回收率为102.5%(n=5),RSD=1.7%。结论 该方法为评价和控制消糖灵颗粒的质量提供了依据。
【关键词】消糖灵颗粒黄芪甲苷HPLC-ELSD含量测定
【中图分类号】R927.2【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484(2010)08-0-01
消糖灵颗粒主要由黄芪、人参、天花粉等十一味中药以及格列本脲组成,是从部颁标准中药成方制剂消糖灵片改剂型而来。具有益气养阴,清热泻火,益肾缩尿之功效,用于糖尿病。原制剂的质量控制相对简单,仅有薄层鉴别以及格列本脲的含量测定,不能完全反映制剂的质量及临床疗效,我们通过研究,对消糖灵颗粒中的中药黄芪进行含量测定,以评价和控制制剂的质量。
1 仪器与试药
Waters 600E型高效液相色谱泵,Alltech 2000型蒸发光散射检测器,Millennium32色谱工作站数据处理系统。乙腈(色谱纯),重蒸馏水(新鲜制备),其余试剂均为分析纯。黄芪甲苷对照品(中国药品生物制品检定所提供)。消糖灵颗粒由黑龙江中医药大学中医药研究院提供。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱:Kromasil C18柱(4.6×200mm,5μ);流动相:乙腈-水(32:68);柱温:40℃;流速,1.0ml/min。ELSD条件:漂移管温度:105℃;载气流量:2.5L·min-1。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取黄芪甲苷对照品适量,加甲醇溶解制成每1ml含黄芪甲苷0.40mg的溶液,作为对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备
取本品约10g,精密称定,置索氏提取器中,加乙醚50ml回流提取3小时,弃去乙醚提取液,药渣及滤纸筒挥干乙醚,加甲醇60ml回流提取约8小时,至提取液近无色,将甲醇提取液蒸干,残渣加水20ml微热使溶解,用水饱和的正丁醇提取5次(30,20,20,20,20ml),合并正丁醇层,用氨试液洗2次,每次30ml,弃去氨试液,正丁醇层用正丁醇饱和的水20ml洗一次,分取正丁醇层,蒸干,残渣加甲醇溶解并定容于10ml量瓶中,摇匀,以0.45μm滤膜滤过,即得。
2.4 线性范围
分别精密吸取上述对照品溶液5、8、10、15、20μL,注入液相色谱仪,以峰面积的自然对数值为纵坐标,以进样量(μg)的自然对数值为横坐标进行线性回归,其回归方程为:Y=1.6102X+12.1543(r=0.999 5)。表明黄芪甲苷在2.0-8.0μg范围内线性关系良好。因该标准曲线不过原点,所以样品采用外标两点法测定。
2.5 精密度试验
精密吸取对照品溶液连续进样5次,每次5μl,RSD=0.6%。
2.6 稳定性试验
供试品溶液制备完成后,分别在0、2、8、12、24小时进样记录色谱图及峰面积值,并计算含量值,结果供试品溶液稳定性良好,RSD=1.3%(n=5)。
2.7 重现性试验
取同一批样品按“供试品溶液的制备”项下制备5份供试液,分别进样测定,计算含量,RSD=1.5%(n=5)。
2.8 加样回收率试验
取已知含量(0.3512mg·g-1)的消糖灵颗粒约5g,共5份,精密称定,每份精密加入黄芪甲苷对照品1.8mg, 按“供试品溶液的制备”项下处理并测定,计算平均回收率为102.5%,RSD=1.7%(n=5)。
2.9 样品测定
分别精密吸取对照品溶液5μl、10μl及供试品溶液15μl,注入液相色谱仪中,将峰面积及浓度均取自然对数后用外标两点法计算,求出供试品浓度的自然对数,再转换成供试品的含量即得。样品含量测定结果见表1,对照品及供试品色谱图见图1。
3 讨论
(1)因黄芪甲苷紫外吸收较差,是末端吸收,若用紫外检测器检测,则其灵敏度低,干扰较大,重现性较差,尤其对于复方制剂,测定其含量更加困难 ......
您现在查看是摘要介绍页，详见PDF附件(650KB，1页)。