Snail 和E- cadherin 在上皮性卵巢癌组织中的表达及其意义
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卵巢癌死亡率居妇科恶性肿瘤之首。上皮性卵巢癌大约占全部卵巢恶性肿瘤的80 % ,有研究报道高度恶性的上皮源性肿瘤细胞在一定因素的影响下,可以发生上皮细胞-间叶细胞转化( epithelial-mesenchymal transition ,EMT) ,伴随EMT的发生,上皮细胞标志物的降低,间叶细胞标志物表达的增强,细胞间黏附能力降低,最终导致肿瘤细胞运动和侵袭能力增强[1] 。Snail是一种抑制型的转录因子, E-cadherin 是一种重要的上皮细胞间黏附分子,Snail可以通过直接抑制E-cadherin的表达从而触发EMT的发生,进而使上皮源性肿瘤细胞运动和侵袭能力增强[2] 。为了阐明卵巢癌细胞是否通过EMT导致其远处转移,我们采用免疫组化法检测并比较上皮性卵巢癌和正常卵巢组织中上皮细胞标志物E-cadherin 的表达情况,以及与Snail 蛋白表达的关系,分析其与卵巢癌临床病理特征间的关系,从而探讨其在卵巢癌发生、发展中的作用。
1.1 标本来源与临床资料 60例上皮性卵巢细胞癌组织标本均来自广东省深圳市人民医院妇科2002-2010年手术切除,临床资料完整的石蜡包埋组织,所有肿瘤患者术前均未接受过放疗或化疗。
1.2 试剂 兔抗人Snail抗体(Santa Cruz公司) ,兔抗人E-cadherin 抗体(Santa Cruz 公司)。Histostain-SP免疫组织化学试剂盒(Zymed公司)。
1.3 免疫组化检测 采用免疫组化链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶复合物法(SP法) ,用磷酸盐缓冲液代替一抗作为空白对照。石蜡包埋切片60℃烘箱烘片30min ,依次经过梯度乙醇脱蜡后PBS振洗,3%过氧化氢溶液室温封闭10min , PBS 振洗,pH 6.0的枸橼酸盐缓冲液92-98 ℃微波修复抗原15min ,自然冷却到室温, PBS 振洗,二抗来源动物血清(1∶10) 室温封闭30min后甩干不洗,分别加Snail 抗体(1：100) 和E-cadherin 抗体(1∶100) ,4℃孵育过夜。PBS 振洗,再加生物素化的二抗室温孵育30min 。PBS 振洗后DAB显色。常规复染、脱水、透明、封片后显微镜下观察。
1.4 结果判定与分析 Snail 结果为肿瘤细胞异常表达或者不表达,表现为胞核或者胞质内为棕黄色, ≥5 %的染色阳性的肿瘤细胞被判断为Snail 异常表达, < 5 %的染色阳性的肿瘤细胞被判断为Snail不表达。E-cadherin 结果为肿瘤细胞异常表达(低表达或者缺失) 或者正常表达
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