RP—HPLC法测定白芍愈伤组织中芍药双苷的含量(2)
 |
| 第1页 |
参见附件。
芍药苷标准品(≥97%，货号1023930)、芍药内酯苷标准品(≥97%，货号1023928)由西亚试剂提供；甲醇、乙腈为色谱纯(上海安普科学仪器有限公司)；磷酸二氢钾为分析纯，水为超纯水；样品材料(亳州芍药叶愈伤组织)为本实验室自行培养。
1.2 愈伤组织培养
选取实验室种植的生长旺盛、无病虫害的亳州芍药植株叶片，反复冲洗干净后于超净工作台内用75% 酒精(v/v)消毒30 s，然后用10% NaClO浸泡10 min，再用无菌水冲洗3～5次，置无菌滤纸上晾干，切为1 cm2左右后接种在诱导培养基[9]中进行培养，25 d后将诱导出的生长较好的愈伤组织切割成小块后转接至固体继代培养基中进行培养，培养温度(24±1)℃，光照强度1500 lx，32 d后收获培养好的愈伤组织。
1.3 芍药愈伤组织中芍药双苷的提取
在60 ℃恒温鼓风干燥箱将愈伤组织样品干燥至恒重，然后研磨为粉，再用一定体积的甲醇浸渍约5 min，尔后60℃下超声处理30 min(功率为120 W)，萃取液在10 000 rmp离心10 min后收集上清，离心上清液经0.22 μm微孔滤膜过滤，获得芍药双苷粗提物。
2.1线性关系考察
取1.4.2项下制备的对照品溶液，用超纯水由高至低对半稀释制得系列浓度的对照品溶液(芍药苷浓度范围5.2 ～ 83.2 μg/mL，芍药内酯苷浓度范围1.0 ～ 32.0 μg/mL，n=6)，精密吸取20 μL注入高效液相色谱仪，记录色谱峰面积。以对照品浓度(x)为横坐标、峰面积(y)为纵坐标绘制标准曲线，得芍药内酯苷线性回归方程y=20 186 x-6 387.8，r=0.998 7，芍药苷线性回归方程y=26 104 x +1 035.8，r=0.999 9。芍药苷浓度在5.2 ～ 83.2 μg/mL范围内线性关系良好，芍药内酯苷浓度在1.0 ～ 32.0 μg/mL范围内线性关系良好。
2.2精密度试验
取对照品溶液 ......
您现在查看是摘要介绍页，详见PDF附件。