【摘 要】探讨检测新鲜海螺样品中单增李斯特菌的双重PCR快速检测方法。基于单增李斯特菌hlyA基因和李斯特菌属的16sRNA基因分别合成两对引物，对影响PCR的主要因素进行优化，最终确定同时检测单增李斯特菌两个特异性基因的双重PCR最佳反应体系及条件，该方法对于纯培养物的最低检出限为102CFU/mL，模拟污染海螺样品的检测限为8CFU/g。

    【关键词】单增李斯特菌；双重PCR；海螺样品

    【中图分类号】R197 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484(2019)01-0225-02

    本工作将单增李斯特菌最重要的毒力因子-编码溶血素的hlyA基因，与李斯特菌属16sRNA基因同时作为单增李斯特菌的检测指标，将双重PCR方法与选择性增菌法相结合，旨在建立一种快速灵敏检测单增李斯特菌的双重PCR方法。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 菌种

    单增李斯特菌标准株由省疾病预防控制中心提供；大肠杆菌(Escherichia coil)、沙门氏菌(Salmonella)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、产气杆菌(Aerobacter aerogenes)和伤寒杆菌(Salmonella typhi)为本实验室保存菌株 ......