不同标本前处理方法对血管紧张素测定结果的影响
摘要： [目的] 探讨不同的标本前处理方法对血管紧张素Ⅰ、Ⅱ(A Ⅰ、A Ⅱ)测定结果的影响。 [方法] 分别采用3种不同方法对40例病人的静脉血标本进行处理，分离血浆后用化学发光法检测A Ⅰ和A Ⅱ的水平。方法1为按说明书用血常规真空管采血后立即加入酶抑制剂；方法2为在血常规管中事先加好酶抑制剂再采血；方法3为用血常规管采血后在冰箱放置1 h再加入酶抑制剂。 [结果] 方法2检测出的A Ⅰ、A Ⅱ水平与方法1的检测结果差异无统计学意义，方法3检测的A Ⅰ、A Ⅱ水平明显低于方法1。 [结论] 加酶抑制剂能抑制A Ⅰ、A Ⅱ、A Ⅲ等转换，先加入酶抑制剂和采血后再加入对检测结果均无明显影响，方法2还可避免漏加抑制剂。
关键词： 血管紧张素； 检测； 酶抑制剂
中图分类号： R 446.11 文献标志码： B
肾素-血管紧张素-醛固酮(RAAS)系统是人体重要的水电解质平衡调节系统，血管紧张素Ⅱ(A Ⅱ)是RAAS中主要的生物活性成分，A Ⅱ与血管、平滑肌、肾上腺皮质及其他组织的血管紧张素受体结合产生各种生理效应。其对于心血管疾病＼[1＼]、脑血管疾病＼[2＼]、糖尿病肾病＼[3-4＼]、脓毒症＼[5＼]等的发生都有重大关联，准确测定血管紧张素ⅠA Ⅰ、A Ⅱ是对疾病正确诊断和治疗的保障。我们采用3种不同的标本前处理方法测定A Ⅰ、A Ⅱ水平，现将结果报道如下。
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1 材料与方法
1.1 标本来源
收集2012年7—8月来我院就诊的门诊患者40例，其中男15例，女25例。
1.2 仪器和试剂
浙江拱东公司的血常规真空采血管。深圳新产业生物医学工程有限公司的MAGLUMI 2000及其配套的A Ⅰ、A Ⅱ试剂盒。
1.3 方法
采集40例门诊患者的静脉血，每位受试者用一次性无菌注射器抽取静脉血约6 mL，将血液分成3份进行不同的前处理(酶抑制剂与静脉血的比例严格按照试剂说明书)。
方法1： 严格按照试剂说明书的加样步骤操作，即2 mL静脉血加入血常规管后立即加入20 μL 8-羟基喹啉硫酸盐混均，离心分离血浆。
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方法2：先在血常规管中加入20 μL的8-羟基喹啉硫酸盐，再加入2 mL静脉血混均，离心分离血浆。
方法3：2 mL静脉血加入血常规管后在冰箱放置1 h，再加入20 μL 8-羟基喹啉硫酸盐混均，离心分离血浆。
采用化学发光竞争法检测A Ⅰ、A Ⅱ。检测原理：标本中的A Ⅰ、A Ⅱ抗原与6-＼[N-(4-氨基丁基)-N-乙基＼]-氯基-2，3-二氢吩噻嗪-1，4-二酮(ABEI)标记的A Ⅰ、A Ⅱ抗原竞争结合包被在磁性微球上的A Ⅰ、A Ⅱ多克隆抗体，发生免疫反应，外加磁场沉淀，去掉上清液，用洗液清洗沉淀复合物加入发光底物测定相对光强度。A Ⅰ、A Ⅱ浓度与光强度成一定比例关系。
1.4 统计学处理
所有检测结果以x-±s表示，采用SPSS 10.0统计软件，方法1与方法2、方法1与方法3的差异比较采用配对t检验，P≤0.05表示差异有统计学意义。
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2 结果
方法1测得的A Ⅰ值和A Ⅱ值分别为(1.33±1.92)ng/mL和(142.40±37.07) pg/mL，方法2测得的A Ⅰ值和A Ⅱ值分别为(1.40±2.95)ng/mL和(137.23±31.66)pg/mL，方法3测得的A Ⅰ值和A Ⅱ值分别为(0.83±1.01)ng/mL和(115.40±43.74)pg/mL，方法1与方法2的测定结果比较，差异无统计学意义(P均>0.05)，方法1与方法3的测定结果比较，差异有统计学意义(P<0.05)。
3 讨论
RAAS是肾脏分泌肾素引起的一系列激素构成，A Ⅰ是由肝脏合成的血管紧张素原经肾素水解后产生的，再经过肺循环经血管紧张素转化酶的作用下生成A Ⅱ＼[6＼]，而后在血浆和组织中经血管紧张素酶A作用成为血管紧张素Ⅲ(A Ⅲ)。A Ⅱ作为效应分子可刺激醛固酮的释放，通过血液循环作用于其他器官，主要功能是调节人体血压、水分、电解质和保持容量内环境的稳定性，在维持血压和体液平衡中起关键作用。目前， A Ⅰ和A Ⅱ作为重要的实验室指标在临床观察和医学研究中被广泛地运用。但在实际操作中，因为A Ⅰ和A Ⅱ的检测操作过程繁琐，影响因素较多，一般医院很少开展，并且相关文献＼[7＼]较少。尽量减少和避免各种血管紧张素间的转换对保证A Ⅰ和A Ⅱ水平测定的精确性，减少由方法学差异引起的结果不一致是至关重要的。其中加酶抑制剂和采血的顺序，以及是否及时加入酶抑制剂，对结果有较大的影响。
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本研究检测RAAS指标采用化学发光竞争法。A Ⅰ、A Ⅱ要求用酶抑制剂抗凝管检测。试剂盒提供的酶抑制剂是8-羟基喹啉硫酸盐，是一种金属敖合剂，能使血管紧张素转化酶ACE和血管紧张素酶失活从而抑制A Ⅰ、A Ⅱ和A Ⅲ之间的互相转换，以便能够精确测定各值。为避免酶抑制剂和抗凝剂互相反应，方法1严格按照说明书操作，先让血液与抗凝剂混均，再加入酶抑制剂，这样避免了酶抑制剂和抗凝剂的接触。方法2是先把酶抑制剂加入了试管中，与抗凝剂直接接触。但从方法1和方法2的结果看来，在抽血前后加8-羟基喹啉硫酸盐，A Ⅰ、A Ⅱ的检测结果无明显差异。这可能是因为我们在实验中是把8-羟基喹啉硫酸盐加到了管底，而血常规真空采血管中的抗凝剂是均匀地吸咐在管壁上，试管底部的抗凝剂量较少。再加上本实验加好8-羟基喹啉硫酸盐后0.5 h内就加入静脉血，两者可能未来得及起反应，因此对结果影响不大。如果延长两者混合时间是否会影响结果，还需进一步研究。而方法3是将标本先放入冰箱保存1 h后再加入8-羟基喹啉硫酸盐，所测得的A Ⅰ、A Ⅱ明显有较大的下降(P<0.05)。这说明如果没有酶抑制剂的作用，A Ⅰ被转化成了A Ⅱ，A Ⅱ继续向A Ⅲ转换，造成A Ⅰ和A Ⅱ的下降。
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实验室的质量控制包括分析前、分析中和分析后3个阶段，而分析前质量控制是潜在影响因素最多，最难控制的环节，已经成为当今实验室保证结果准确的重要核心部分＼[8＼]。我院住院病人一般为早晨6时左右采血，多由护士或临床医生执行，为避免因医护人员培训不足而在采血后漏加酶抑制剂，可将事先加入酶抑制剂的血常规管送到临床备用，但要尽快使用并在冰箱保存。综上所述，临床检验人员要加强与医护人员的沟通，使其了解正确的标本前处理方法，从而使检测结果准确，可靠。
4 参考文献
[1]马宇虹，李广平，刘彤，等.RAAS激活与急性心肌梗死早期新发房颤的关系＼[J＼].山东医药，2010，50(4)：26-28.
[2]夏青青，李娟娟，郭泽云.血管紧张素Ⅱ及其受体在脑血管疾病中作用研究进展＼[J＼].神经解剖学杂志，2012，28(1)：89-92.文章编号：1004-9231(2013)03-0151-02, http://www.100md.com(黄芸菲 吴巧萍 杨俊杰)
关键词： 血管紧张素； 检测； 酶抑制剂
中图分类号： R 446.11 文献标志码： B
肾素-血管紧张素-醛固酮(RAAS)系统是人体重要的水电解质平衡调节系统，血管紧张素Ⅱ(A Ⅱ)是RAAS中主要的生物活性成分，A Ⅱ与血管、平滑肌、肾上腺皮质及其他组织的血管紧张素受体结合产生各种生理效应。其对于心血管疾病＼[1＼]、脑血管疾病＼[2＼]、糖尿病肾病＼[3-4＼]、脓毒症＼[5＼]等的发生都有重大关联，准确测定血管紧张素ⅠA Ⅰ、A Ⅱ是对疾病正确诊断和治疗的保障。我们采用3种不同的标本前处理方法测定A Ⅰ、A Ⅱ水平，现将结果报道如下。
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1 材料与方法
1.1 标本来源
收集2012年7—8月来我院就诊的门诊患者40例，其中男15例，女25例。
1.2 仪器和试剂
浙江拱东公司的血常规真空采血管。深圳新产业生物医学工程有限公司的MAGLUMI 2000及其配套的A Ⅰ、A Ⅱ试剂盒。
1.3 方法
采集40例门诊患者的静脉血，每位受试者用一次性无菌注射器抽取静脉血约6 mL，将血液分成3份进行不同的前处理(酶抑制剂与静脉血的比例严格按照试剂说明书)。
方法1： 严格按照试剂说明书的加样步骤操作，即2 mL静脉血加入血常规管后立即加入20 μL 8-羟基喹啉硫酸盐混均，离心分离血浆。
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方法2：先在血常规管中加入20 μL的8-羟基喹啉硫酸盐，再加入2 mL静脉血混均，离心分离血浆。
方法3：2 mL静脉血加入血常规管后在冰箱放置1 h，再加入20 μL 8-羟基喹啉硫酸盐混均，离心分离血浆。
采用化学发光竞争法检测A Ⅰ、A Ⅱ。检测原理：标本中的A Ⅰ、A Ⅱ抗原与6-＼[N-(4-氨基丁基)-N-乙基＼]-氯基-2，3-二氢吩噻嗪-1，4-二酮(ABEI)标记的A Ⅰ、A Ⅱ抗原竞争结合包被在磁性微球上的A Ⅰ、A Ⅱ多克隆抗体，发生免疫反应，外加磁场沉淀，去掉上清液，用洗液清洗沉淀复合物加入发光底物测定相对光强度。A Ⅰ、A Ⅱ浓度与光强度成一定比例关系。
1.4 统计学处理
所有检测结果以x-±s表示，采用SPSS 10.0统计软件，方法1与方法2、方法1与方法3的差异比较采用配对t检验，P≤0.05表示差异有统计学意义。
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2 结果
方法1测得的A Ⅰ值和A Ⅱ值分别为(1.33±1.92)ng/mL和(142.40±37.07) pg/mL，方法2测得的A Ⅰ值和A Ⅱ值分别为(1.40±2.95)ng/mL和(137.23±31.66)pg/mL，方法3测得的A Ⅰ值和A Ⅱ值分别为(0.83±1.01)ng/mL和(115.40±43.74)pg/mL，方法1与方法2的测定结果比较，差异无统计学意义(P均>0.05)，方法1与方法3的测定结果比较，差异有统计学意义(P<0.05)。
3 讨论
RAAS是肾脏分泌肾素引起的一系列激素构成，A Ⅰ是由肝脏合成的血管紧张素原经肾素水解后产生的，再经过肺循环经血管紧张素转化酶的作用下生成A Ⅱ＼[6＼]，而后在血浆和组织中经血管紧张素酶A作用成为血管紧张素Ⅲ(A Ⅲ)。A Ⅱ作为效应分子可刺激醛固酮的释放，通过血液循环作用于其他器官，主要功能是调节人体血压、水分、电解质和保持容量内环境的稳定性，在维持血压和体液平衡中起关键作用。目前， A Ⅰ和A Ⅱ作为重要的实验室指标在临床观察和医学研究中被广泛地运用。但在实际操作中，因为A Ⅰ和A Ⅱ的检测操作过程繁琐，影响因素较多，一般医院很少开展，并且相关文献＼[7＼]较少。尽量减少和避免各种血管紧张素间的转换对保证A Ⅰ和A Ⅱ水平测定的精确性，减少由方法学差异引起的结果不一致是至关重要的。其中加酶抑制剂和采血的顺序，以及是否及时加入酶抑制剂，对结果有较大的影响。
, 百拇医药
本研究检测RAAS指标采用化学发光竞争法。A Ⅰ、A Ⅱ要求用酶抑制剂抗凝管检测。试剂盒提供的酶抑制剂是8-羟基喹啉硫酸盐，是一种金属敖合剂，能使血管紧张素转化酶ACE和血管紧张素酶失活从而抑制A Ⅰ、A Ⅱ和A Ⅲ之间的互相转换，以便能够精确测定各值。为避免酶抑制剂和抗凝剂互相反应，方法1严格按照说明书操作，先让血液与抗凝剂混均，再加入酶抑制剂，这样避免了酶抑制剂和抗凝剂的接触。方法2是先把酶抑制剂加入了试管中，与抗凝剂直接接触。但从方法1和方法2的结果看来，在抽血前后加8-羟基喹啉硫酸盐，A Ⅰ、A Ⅱ的检测结果无明显差异。这可能是因为我们在实验中是把8-羟基喹啉硫酸盐加到了管底，而血常规真空采血管中的抗凝剂是均匀地吸咐在管壁上，试管底部的抗凝剂量较少。再加上本实验加好8-羟基喹啉硫酸盐后0.5 h内就加入静脉血，两者可能未来得及起反应，因此对结果影响不大。如果延长两者混合时间是否会影响结果，还需进一步研究。而方法3是将标本先放入冰箱保存1 h后再加入8-羟基喹啉硫酸盐，所测得的A Ⅰ、A Ⅱ明显有较大的下降(P<0.05)。这说明如果没有酶抑制剂的作用，A Ⅰ被转化成了A Ⅱ，A Ⅱ继续向A Ⅲ转换，造成A Ⅰ和A Ⅱ的下降。
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实验室的质量控制包括分析前、分析中和分析后3个阶段，而分析前质量控制是潜在影响因素最多，最难控制的环节，已经成为当今实验室保证结果准确的重要核心部分＼[8＼]。我院住院病人一般为早晨6时左右采血，多由护士或临床医生执行，为避免因医护人员培训不足而在采血后漏加酶抑制剂，可将事先加入酶抑制剂的血常规管送到临床备用，但要尽快使用并在冰箱保存。综上所述，临床检验人员要加强与医护人员的沟通，使其了解正确的标本前处理方法，从而使检测结果准确，可靠。
4 参考文献
[1]马宇虹，李广平，刘彤，等.RAAS激活与急性心肌梗死早期新发房颤的关系＼[J＼].山东医药，2010，50(4)：26-28.
[2]夏青青，李娟娟，郭泽云.血管紧张素Ⅱ及其受体在脑血管疾病中作用研究进展＼[J＼].神经解剖学杂志，2012，28(1)：89-92.文章编号：1004-9231(2013)03-0151-02, http://www.100md.com(黄芸菲 吴巧萍 杨俊杰)