紫杉醇对小鼠肝癌皮下移植瘤血管生成和肿瘤生长作用
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2011年2月1日
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【摘要】目的 通过小鼠肝癌皮下移植瘤模型,观察紫杉醇对小鼠肝细胞癌血管生成和肿瘤生长的干预作用。方法 30只小鼠肝癌皮下移植瘤模型随机分成实验组和对照组,每组15只。自模型建立次日始两组分别给予13 mg·kg-1·d-1剂量紫杉醇和等体积生理盐水腹腔注射,给药第25 d 处死裸小鼠,分别用免疫组化和免疫荧光的方法检测癌组织CD34的表达水平和检测肿瘤细胞的凋亡情况,记录微血管密度(MVD)和凋亡指数 。结果 紫杉醇组肿瘤重量和MVD均低于对照组( P < 0. 05),肿瘤细胞凋亡指数高于对照组 ( P < 0. 05)。结论 紫杉醇对小鼠肝细胞癌生长有抑制作用,抑制肝细胞癌的血管生成并促进肿瘤细胞凋亡。
【关键词】肝细胞癌 血管生成 紫杉醇
中图分类号：R9文献标识码：B文章编号：1005-0515(2011)2-226-02
紫杉醇 (taxol ,paclitaxel) 是一种微管稳定剂,最早在20世纪70 年代首先从美国西部紫杉中分离得到,它通过稳定微管阻断细胞有丝分裂、最终产生细胞毒作用从而抑制肿瘤生长[1] ,现已在临床上有广泛应用。肿瘤的生长有赖于血管生成,抗血管生成是肿瘤治疗领域中的研究热点。本研究通过建立肝癌HEPS小鼠皮下移植瘤模型旨在观察紫杉醇对小鼠肝癌HEPS生长的干预作用并探讨其机制,为开展临床实验提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 主要试剂 紫杉醇针剂购自哈药集团生物工程有限公司。抗CD34 单克隆抗体为Santa Cruz 公司产品。TUNEL 试剂盒为罗氏公司产品。
1.2 实验动物模型癌HEPS瘤株，由江苏省肿瘤防治研究所提供。KM小鼠: 雄性,6-8 周龄,体重18～20 g ,购于包头医学院动物中心。小鼠于清洁级环境中饲养。
1.3 动物分组及干预治疗30 只小鼠分为2 组,对照组和实验组,每组15只。自模型建立次日2 组分别经腹腔注射生理盐水和紫杉醇(13mg·kg-1·d-1) 。紫杉醇每给药5 次停药3d ,停药期间仍给予生理盐水注射。
1.4 肿瘤大体相关指标检测实验第25 d 处死KM小鼠并分离皮下肿瘤,称重,另取部分癌组织于- 80 ℃保存备用。
1.5 免疫组化染色和微血管密度( MVD) 计数采用免疫组化SP 法染色肿瘤 组织。观察CD34 表达情况并记录MVD ,MVD 计算采用Weidner 等[2] 的校正技术。由专业病理医师盲法操作。
1.6 肿瘤细胞凋亡检测肿瘤组织石蜡切片采用TdT介导的带生物素dUTP缺口末端标记技术(terminal de-oxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nickend labeling ，TUNEL) 检测细胞凋亡指数。操作严格按试剂盒说明进行。
1. 7 统计学处理所有数据均经SPSS 13.0 统计软件处理,统计方法为两样本的t 检验(α= 0.05) 。
2 结果
2.1对肿瘤生长的影响第25 d 所有裸鼠均见皮下隆起性肿块,侵及皮肤。裸鼠瘤重见表1。实验组瘤重小于对照组(P<0.05) 。
2.2对肿瘤细胞凋亡的影响TUNEL法检测肿瘤组织凋亡指数,实验组高于对照组,有统计学差异(表1，图1) 。
2.3CD34 的表达和MVD 记数CD34 在实验组癌组织中不表达或仅呈弱阳性表达;而对照组中则呈阳性或强阳性表达,呈棕黄色或棕褐色窦隙状分布于纤维间隔内的血管壁,其表达率和表达强度均高于实验组(图2) 。计数MVD 见表1
表1 各组间肿瘤质量、血管生成及肿瘤细胞凋亡情况的比较(x±s)
*与对照组相比, P <0.05
3 讨论
血管生成(angiogenesis) 是指在已形成血管的基础上形成新血管的过程,它是维持肿瘤生长和发生转移的前提。肿瘤尚无血管长入时其生长不会超过2～3 mm3 ,这种微转移灶可长期处于“冬眠状态”[3] 。肿瘤的侵袭性生长及转移依赖于血管生成,肿瘤的血管系统目前已成为一个新的抗肿瘤治疗靶点。本实验通过建立小鼠肝癌皮下移植瘤模型,并用紫杉醇干预治疗,对照发现治疗组的肿瘤重量明显低于对照组,因此紫杉醇能抑制HEPS的生长。以前的文献报道了紫杉醇作为一种细胞毒剂,因为其稳定微管特性使细胞阻滞于G2/M 期而诱导肿瘤细胞凋亡[4] 。近年有研究显示紫杉醇通过作用于内皮细胞发挥其抗血管生成作用。在我们的实验里紫杉醇干预组的MVD明显低于对照组,血管新生明显的受到了抑制，紫杉醇干预组肿瘤细胞凋亡指数明显高于对照组，紫杉醇具有显著的促进HEPS肿瘤细胞凋亡的作用。因此,可以推测在我们的研究中紫杉醇对HEPS的抑制是由于其对HEPS 直接的细胞毒作用和抗血管生成作用,促进肿瘤细胞的凋亡 ,本实验进一步证明了紫杉醇通过抗血管生成和促进肿瘤细胞凋亡作用抑制肿瘤生长,是一种极其有效的化疗药物。
参考文献
[1]Horwitz SB ......
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