某市市售马铃薯转基因成份检测
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【摘要】目的 检测某市售马铃薯转基因成分。方法 采用CTAB法提取样品的基因组DNA，分别设计启动子CaMV 35s(promoter from canliflomer mosaic virus，花椰菜花叶病毒35s启动子)和终止子NOS(nopaline synthase lerminator，胭脂碱合成酶3’转录终止子)作为特异性引物，然后对基因组DNA进行PCR扩增检测，根据扩增后产物的琼脂糖凝胶电泳图可分析出其中是否含有转基因成分。结果 10份马铃薯样品中5份检测出含有转基因成份，占检测样品的50%。结论 由结果推断出出现在银川市场上销售的转基因马铃薯占总的马铃薯销售量的比例为50%。
【关键词】转基因食品 转基因检测 DNA提取 马铃薯
中图分类号：R 文献标识码：A 文章编号：1005-0515(2011)6-035-02
Detection of genetically modified potatos from market
【Abstract】Objective Detection of genetically modified potatos frommarket. Methods This study is about using the exogenous promoter and lerminator which often used in genetically modified organisms such as CaMV 35s (promoter from canliflomer mosaic virus) and NOS (nopaline synthase lerminator) as the detection primers to genetically engineered detect on Yinchuan city’s commercial potato. First of all is extract genomic DNA with CTAB, then carried out PCR amplification on genomic DNA. According to the PCR amplification product’s agarose gel electrophoresis can analyze whether it contains genetically modified ingredients. Results The results showed that: 50 % of potato samples were detected to contain genetically modified ingredients.Conclusion wereduce that 50 % of potato include genetically modified ingredients in Yinchuan’s market.
【Key words】 genetically modified food GM testing DNA extraction potato
本研究以转基因作物使用的启动子和终止子作为转基因检测指标，分别设计启动子CaMV 35s(promoter from canliflomer mosaic virus，花椰菜花叶病毒35S启动子)和终止子NOS(nopaline synthase lerminator，胭脂碱合成酶3’转录终止子)的特异性引物，对银川市售马铃薯进行转基因检测。
1 材料和方法
1.1 材料
从银川市各个市场及超市随机购买马铃薯。
液氮、研钵、1.5ml EP管、恒温水浴锅、离心机、电泳仪、微波炉、凝胶成像系统、PCR扩增仪、高压灭菌锅等。1mol/L Tris-HCl(PH8.0)、0.5M EDTA(PH 8.0)、CTAB提取液、3mol/L醋酸钠(PH 5.6)
1.2 方法
1.2.1 基因组DNA的提取
按照参考文献[2] 提取基因组DNA。
1.2.2 电泳检测
将提取出来的10组DNA产物进行琼脂糖凝胶电泳，用凝胶成像系统观察、照相、记录。检测其是否为DNA以及其纯度如何。
1.2.3 对提取产物的PCR检测[3-4]
1.2.3.1 设计引物
18S：18S rDNA
CaMV 35s：promoter from canliflomer mosaic virus，花椰菜花叶病毒35S启动子
NOS：nopaline synthase lerminator，胭脂碱合成酶3’转录终止子
1.2.3.2 PCR反应体系
按照Wizard PCR prepsDNAPurification System试剂盒要求进行PCR反应。
2 结果
2.1 马铃薯DNA的电泳图
从图中(图1-1)可见1-10号样品均成功提取出基因组DNA。
2.2 PCR检测
2.2.1 内标的检测
对马铃薯样品DNA用18S rDNA引物进行PCR扩增，如果出现预期大小的条带，则说明提取出的基因组DNA能够经过PCR扩增得出特定序列，可进一步用于外源基因检测并进行转基因成分的判定；如果没有出现预期大小的条带，则重复DNA提取，直到扩增出目标条带。本实验分别对马铃薯样品DNA用18S rDNA引物进行PCR扩增后，扩增出特异条带且大小与理论值相符，扩增结果如图1-2。
图1-2 马铃薯18s引物PCR扩增电泳图
2.2.2 外源基因的检测
对提取出的马铃薯样品基因组DNA设计适当的引物进行PCR测试，如果待测样品PCR扩增产物的电泳图中出现预期大小的电泳条带，则可初步判定待测样品中含有可疑的外源基因；如果电泳图中未出现预期大小的电泳条带，则可断定待测样品中不含有该外源基因 ......
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