实验性自身免疫性重症肌无力大鼠干扰素-γ和白细胞介素-12水平变化的研究(1)
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【摘 要】目的 探讨干扰素(IFN)-γ和白细胞介素(IL)-12在实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)发病机制中的作用。方法 10只Lewis大鼠随机分为EAMG组和健康对照组。EAMG组采用AChR二次免疫的方法制作EAMG模型，观察大鼠EAMG症状。于初次免疫后第7周，对大鼠进行Lennon评分，采用酶联免疫吸附试验和RT-PCR方法分别检测大鼠脾脏T淋巴细胞IFN-γ和IL-12p35 mRNA的表达水平。结果 AChR二次免疫后，EAMG组大鼠产生了典型的EAMG症状。初次免疫后第7周，EAMG组大鼠Lennon评分及其脾脏T淋巴细胞IFN-γ和IL-12p35 mRNA的表达水平均显著高于健康对照组(P﹤0.01)。结论 EAMG大鼠脾脏T淋巴细胞IFN-γ和IL-12的表达增强，提示IFN-γ和IL-12在EAMG的发病机制中具有重要作用。
【关键词】重症肌无力 干扰素-γ 白细胞介素-12
中图分类号：R746.1 文献标识码：A 文章编号：1005-0515(2011)7-057-03
【Abstract】Objective To investigate the effect of interferon(IFN)-γ and interleukin(IL)-12 on the pathogenesis of experimental autoimmune myasthenia gravis(EAMG). Methods 10 Lewis rats were divided randomly into EAMG group and normal control group.The EAMG mode were induced with the methods of AChR for 2 times in EAMG group, then the symptoms of EAMG were viewed. After 7 weeks of the first immunization, the symptoms of rats were scored as Lennon, the expression of IFN-γ and IL-12 of spleen T cells of rats were measured by the methods of enzyme-linked immunoadsordent assay or RT-PCR. Results The rats of EAMG group showed typical symptoms of EAMG after the second immunization, of which the Lennon score and the expression of IFN-γ and IL-12 of spleen T cells were higher significantly than the normal control group after 7 weeks of the first immunization (P﹤0.01). Conclusions The expression of IFN-γ and IL-12 of spleen T cells of EAMG rats were enhanced, which suggested that IFN-γ and IL-12 play an important role in the pathogenesis of EAMG.
【Key words】Myasthenia gravis Interferon-γ Interleukin-12
重症肌无力(myasthenia gravis，MG)及其实验性自身免疫性重症肌无力(Experimental autoimmune myasthenia gravis，EAMG)是神经肌肉接头传递功能障碍的一种自身免疫性疾病。乙酰胆碱受体抗体(Acetylcholine receptor antibody, AChRab)介导的体液免疫和T细胞介导的细胞免疫是其主要发病机制，胸腺则是激活和维持MG自身免疫反应的重要因素，某些遗传及环境因素也与MG的发病密切相关。近年来国内外学者对细胞因子与MG的关系进行了大量研究，发现细胞因子网络失衡在MG发病机制中起重要作用。本研究通过制作大鼠EAMG模型，检测其T淋巴细胞干扰素(Interferon，IFN)-γ和白细胞介素(Interleukin，IL)-12的表达水平，从T淋巴细胞的功能状态来探讨IFN-γ和IL-12 在EAMG发病机制中的作用。
1 材料与方法
1.1 主要试剂与动物 RPMI-1640培养基、胎牛血清、逆转录试剂盒、TRIZOL为美国Gibco公司产品。PCR Marker购自大连宝生物公司。细胞因子rrIL-4、rrGM-CSF、完全弗氏佐剂(CFA) 均为Sigma公司产品。大鼠IFN-γELISA检测试剂盒为R&D公司产品。乙酰胆碱受体(AChR)由本实验室提取。健康Lewis大鼠，雌性，6～8周龄，重约150g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司。
1.2 EAMG模型的制作 Lewis大鼠，随机分为EAMG组和健康对照组2组，每组5只。EAMG组采用AChR蛋白二次免疫的方法复制EAMG模型：用AChR蛋白与等量CFA的混合乳剂共1.5 ml分别于大鼠足垫、腹部及背部皮下多点注射，行初次免疫；初次免疫后第4周 ......
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