宫颈癌中PAI-1\MDM2的表达及意义
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【摘要】目的 探讨PAI-1、MDM2在宫颈癌中的表达，分析其在宫颈癌发生、发展中的作用。方法 采用免疫组织化学方法检测宫颈癌组织63例，正常宫颈组织15例(对照组)中PAI-1、MDM2的表达。结果 1. PAI-1在正常对照组、宫颈原位癌、高分化组、中低分化组中的阳性表达率差异有显著性(P<0.01)，PAI-1与病理分级有相关性。2. MDM2在对照组与肿瘤组的表达率差异有显著性(P<0.05)，肿瘤组内仅原位癌组与中低分化组表达率差异有显著性(P<0.05)。3.在宫颈癌中PAI-1、MDM2表达无相关性。结论 在宫颈癌组织中PAI-1、MDM2的异常表达提示与肿瘤的发生、发展密切相关。
【关键词】PAI-1MDM2 宫颈癌 免疫组化
中图分类号：R737.3文献标识码：B文章编号：1005-0515(2011)10-053-02
子宫颈癌是女性最常见的恶性肿瘤，占女性恶性肿瘤死亡原因的第二位[1]。在新疆，维吾尔族妇女子宫颈癌患者的死亡率为15.78/10万，汉族为9.98/10万[2]。国内外研究证实[3]，纤溶酶原激活剂抑制剂1型(PAI-1)在不同肿瘤的侵袭和转移过程中起着不同的作用；MDM2基因为一癌基因，作为p53重要的下游基因，MDM2与p53间存在互相反馈调节作用，p53的活化促进MDM2表达，同时MDM2又结合p53，抑制其功能，促进其降解,可导致瘤细胞继续增殖，失去正常的周期控制能力。我们采用免疫组化方法研究PAI-1和MDM2在宫颈癌中的表达及意义。
1 一般材料
1.1 标本来源
随机选取新疆医科大学第一附属医院病理科1994年至2004年63例宫颈癌组织活检标本，均经组织病理证实。维吾尔族共40例，年龄27-88岁，平均年龄44岁，汉族共23例，年龄28-70岁，平均年龄43岁，其中宫颈原位癌8例，宫颈高分化鳞状细胞癌27例，宫颈中低分化鳞状细胞癌28例，并选择正常宫颈组织15例作为正常组。
1.2 试剂
采用EnVision二步法，一抗为兔抗人PAI-1、鼠抗人MDM2多克隆抗体浓缩型，购自博士德生物有限公司。二抗采用兔抗鼠IgGEnVisionTM免疫组化检测试剂即用型工作液，购自DAKO(达克)公司。
1.3 实验方法
2um厚石蜡切片脱腊至水化，3%过氧化氢溶液室温孵育10分钟以消除内源性过氧化物酶，微波炉中火10分钟进行抗原修复，修复液为预热的Tris-EDTA(PH9.0)，室温冷却30分钟，TBS(PH7.6)缓冲液冲洗每次3分钟，3次，滴加一抗，室温过夜；TBS缓冲液冲洗每次3分钟，共3次，滴加二抗，37℃温箱孵育1小时；TBS缓冲液冲洗每次3分钟，共3次，滴加DAB显色剂，DAB稀释度1：40，光镜下观察显色情况，自来水终止显色，最后苏木素复染，脱水、透明、封片。
1.4 染色结果判断
将制好的切片置显微镜下观察，阳性染色为细胞浆内有棕黄色颗粒，每张切片在光学显微镜下取4个高倍视野，各计数200个细胞，按阳性细胞百分比对每张切片的染色强度评分。阳性细胞数<5%为阴性(—)，6%～20%为弱阳性(+)，21%～50%为阳性(++)，>51%为强阳性(+++)。
1.5 统计学处理
采用SPSS17.0软件包分析资料，利用率的x2检验进行统计分析，检验水准α=0.05。
2 结果
2.1 PAI-1在对照组及宫颈癌组的表达情况
表1 PAI-1在正常对照组、子宫颈癌中的表达
注:P＝0.000<0.01
如表1所示，PAI-1阳性表达在细胞浆，在原位癌、各级宫颈癌中均有表达，对照组与肿瘤组，肿瘤组内部(除原位癌组与高分化组外)均存在显著性差异(P<0.01)。
2.2 MDM2在正常对照组及子宫颈癌中的表达
MDM2阳性表达部分定位于细胞核，部分定位于细胞浆，在正常对照组中、原位癌中未见阳性表达，高分化组4例阳性，中低分化组10例阳性，对照组与肿瘤组表达率 有显著性差异(p<0.05)，而肿瘤组内部仅原位癌组与中低分化组表达率有显著性差异(p<0.05)(表2)。
表2 MDM2在正常对照组、子宫颈癌中的表达
注:A:(B+C+D)P=0.044<0.05;B:(C+D)P=0.106>0.05;C:DP=0.075>0.05;B:CP=0.25>0.05;B:DP=0.047<0.05
2.3 PAI-1、MDM2在宫颈癌中的共同表达
表3 PAI-1、MDM2在宫颈癌中表达的相关分析
如表3所示，在宫颈癌中，PAI-1、MDM共同阳性7例，共同阴性表达13例，其表达无相关性。
3 讨论
纤溶酶可以降解大部分的细胞外基质成分，在恶性肿瘤的侵袭与转移中发挥重要作用，它受纤溶酶原激活剂及其抑制剂的调节。纤溶酶原激活剂分为尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)和组织型纤溶酶原激活剂(tPA)，uPA主要在恶性肿瘤的侵袭中发挥作用。uPA是一种丝氨酸蛋白酶，以单链酶原形式(Pro-uPA)由肿瘤细胞分泌，当它和细胞膜表面uPA特异受体uPAR结合后激活成双链形式，活性uPA可激活纤溶酶，对细胞基质及基底膜成分起降解作用，参与或调节肿瘤的迁移和侵袭，PAI-1是一种广泛存在的uPA生理抑制剂， PAI-1能以非共价键的形式与uPA、uPAR结合形成uPAR-uPA-PAI-1复合体，从而抑制uPA活性，抑制肿瘤的浸润与转移。本研究结果显示，PAI-1在癌和正常宫颈组间的表达有显著性差异(P<0.01)，说明肿瘤细胞是分泌PAI-1的主要部位，在宫颈癌的发生和发展过程中发挥了一定的作用。本研究还显示PAI-1在高分化组、中低分化组的阳性表达率也存在显著性差异(P<0.01)。由此可见，随着子宫上皮病变恶性程度的增高，PAI-1表达水平逐渐增高，以中低分化组宫颈癌最明显。本研究结果显示PAI-1的阳性表达与病理分级有关，提示PAI-1可能参与并有促进肿瘤浸润性生长的作用。
MDM2是双微体基因,定位于12q13-14区,MDM2作为一种癌基因最初是从一种致癌的小鼠成纤维细胞中发现的,目前已经发现至少有7种MDMmRNA和5种MDM2蛋白,已在多种肿瘤中发现其突变与扩增,研究表明, MDM2是P53负反馈调节环中的重要因子,当MDM2过度表达时,阻断p53蛋白的转录激活,p53功能抑制或失活,导致细胞异常增生与增殖,促进细胞癌变,另一方面,由于MDM2的活性表达,即使是低水平MDM2的表达,也将会引起细胞成瘤性的增强[4].本实验63例子宫颈癌，有14例MDM2阳性，本实验尚观察到，MDM2在高分化宫颈癌中有4例阳性，而中低分化宫颈癌中有10例阳性，对照组及原位癌未见表达，在对照组与肿瘤组、原位癌组与中低分化组的表达差异有统计学意义(P<0 ......
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