改良Hodge试验在产碳青霉烯酶细菌中的应用及探讨
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【摘要】目的 用改良Hodge 试验检测产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌，初步推测产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌的流行情况。方法 筛选出2010 年1 月～ 2010年6 月对碳青霉烯类抗生素耐药以及敏感性下降或者碳青霉烯类抗生素敏感而一种以上三代头孢菌素耐药的肠杆菌科细菌23 株，用改良Hodge 试验检测其碳青霉烯酶。结果 23 株菌中21 株( 91.3%) 呈多重耐药，其中5株菌改良Hodge 试验阳性，分别为肺炎克雷伯菌1 株、弗劳地枸橼酸杆菌1 株、大肠埃希菌1 株和霍氏肠杆菌2 株。结论 改良Hodge 试验阳性提示所测菌株中有产碳青霉烯酶的肠杆菌科细菌的存在，因此要加强对此类细菌的院内感染管理监测。
【关键词】碳青霉烯酶 肠杆菌科细菌 改良Hodge 试验 院内感染
中图分类号：R445.6 文献标识码：B 文章编号：1005-0515(2012)3-046-02
Modified Hodge test in the production of carbon penem negative bacteria and explore
JIA Xinlan
(Hotan Prefecture, Xinjiang People's Hospital of Hotan, Xinjiang 848000)
【Abstract】Objective The modified Hodge test to detect production of carbon penem enzymes of Enterobacteriaceae bacteria, initially speculated that the prevalence of the production of carbapenemases in Enterobacteriaceae. Methods The screening of carbapenem the vinyl antibiotic resistance and decreased susceptibility or carbapenem antibiotic-sensitive and more than third generation cephalosporins in Enterobacteriaceae 23 January 2010 to June 2010 strains its carbapenemases using the modified Hodge test to detect. Results 23 strains, 21 (91.3%) were multi-drug resistant, including five bacteria modified Hodge test positive a Klebsiella pneumoniae, Citrobacter freundii 1, Escherichia coli 1 and Mikhail Khodorkovsky Enterobacter 2. Conclusion The modified Hodge test-positive prompts the measured production of carbapenemases in Enterobacteriaceae strains exist, to strengthen the management and monitoring of such bacterial nosocomial infection.
【Key words】carbon penem enzyme Enterobacteriaceae; modified Hodge test of nosocomial infections
碳青霉烯类药物是治疗革兰阴性杆菌特别是肠杆菌科细菌感染的最强效β 内酰胺类药物，而碳青霉烯酶能水解碳青霉烯类抗生素，使碳青霉烯类药物的效果降低或消失。本文对临床标本分离的疑似产碳青霉烯酶的肠杆菌科细菌，用改良Hodge 试验进行碳青霉烯酶表型检测，观察其中是否存在产碳青霉烯酶细菌。
1 材料与方法
1.1 仪器与试剂 使用法国梅里埃公司VITEK2compact 微生物鉴定仪，郑州安图公司生产羊血平板及M-H 琼脂平板、药敏纸片( Oxoid公司) ;CO2恒温培养箱 。
1.2 菌株来源 收集2010年1 月～2010 年6月和田地区人民医院微生物室检测的肠杆菌科细菌23 株，其中肺炎克雷伯菌9 株、臭鼻克雷伯菌4 株、大肠埃希菌1 株、阴沟肠杆菌4 株、聚团肠杆菌1 株、产气肠杆菌1 株、枸橼酸杆菌1 株、霍氏肠杆菌2 株。入选标准: 亚胺培南、美罗培南中介或者耐药; 亚胺培南、美罗培南敏感，但有一种以上三代头孢菌素耐药; 剔除同一患者的重复菌株。
1.3 细菌鉴定 将符合初筛条件的菌株转种于血平板上培养过夜，获得单个纯种菌落。将所获菌株采用VITEK2 compact 微生物自动细菌鉴定仪或者手工法鉴定。
1.4 药敏试验 采用K-B 法或者VITEK2 compact进行药敏试验，结果解释参照CLSI 2010 年M100-S20 文件。质控菌株为大肠埃希菌ATCC25922，铜绿假单胞菌ATCC 27853。
1.5 改良Hodge 试验 配制0. 5 麦氏浊度单位大肠埃希菌ATCC 25922 菌液，用无菌生理盐水1：10稀释后均匀涂布于药敏试验平板上，待其干燥3～5min。于平板正中央贴10μg /片美罗培南药敏纸片，用接种环挑取3～5 个待测菌，接种时从平板中心纸片边缘向平板边缘划线，长度20 ～ 25 mm，经35 ℃培养过夜后判定结果。标准大肠埃希菌ATCC25922 与待测菌株抑菌环交汇处大肠埃希菌生长增强为阳性，否则为阴性。阳性质控株为产KPC-2 型碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌 ，阴性质控株为肺炎克雷伯菌ATCC 700603，以上质控菌株购自卫生部。
1.6 MIC 测定 用琼脂稀释法测定亚胺培南、美罗培南对改良Hodge 试验阳性菌株的MIC。整个过程参照CLSI 文件M7-A7推荐的操作方法进行。
2 结果
2.1 药敏结果 23 株菌有21 株呈多重耐药，多重耐药率达91.3%( 21/23)。23 株菌对头孢他啶、头孢噻肟和碳青霉烯类药敏试验结果见表1。
注: R，耐药; I，中介; S，敏感
2.2 改良Hodge 试验结果 23 株菌中改良Hodge试验阴性18 株、阳性5 株，阳性率21. 7% ( 5 /23) 。阳性菌株分别为肺炎克雷伯菌1 株( 19 号) ，弗劳地枸橼酸杆菌1 株( 8 号) ，大肠埃希菌1 株( 7 号) 和霍氏肠杆菌2 株( 18、23 号) 。部分阳性和阴性改良Hodge 试验结果如图1 所示。
图1 改良Hodge 实验结果 ......
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