支原体检测不同方法的比较
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[摘要]目的比较和分析支原体检测不同方法,探索超高倍显微诊断仪的在临床应用的价值。方法 用支原体培养法、直接镜检法(超高倍显微镜)检测986例生殖道分泌物标本,同时用酶联免疫法检测患者血清标本支原体抗体。结果经过三种不同方法检测及结果分析,方法一:支原体培养分离鉴定检测阳性率41.89%(413/986)。方法二:酶联免疫法(ELISA)阳性率36.82%(363/986)。方法三:超高倍显微镜检测MCDMI阳性率42.90%(423/986)。经X2分析,方法一与方法三无显著差异(P>0.05),方法二与方法三有显著差异(P<0.05)。结论超高倍显微镜在泌尿生殖道支原体活体检测中有一定的诊断价值,其准确性较酶联免疫法有一定差距可用于病原微生物的初筛诊断试验,确诊应与临床表现和其他试验相结合。
[关键词]支原体培养;酶联免疫法ELISA;超高倍显微仪
[中图分类号] R446[文章标识码]A[文章编号]
泌尿生殖道非细菌性疾病主要由支原体、衣原体引起,危害大,已经成为男科、妇科炎症的主要原因之一 ,男性可以引起睾丸炎、前列腺炎,女性可引起阴道炎、宫颈炎、宫颈糜烂[1],甚至造成男女不孕不育等多种疾病。目前,支原体的检测方法主要是分离培养、免疫检测及核酸检验[2],普遍存在报告时间长、费用高的问题,超高倍显微诊断仪可以对支原体活体观察,对生殖道分泌物直接涂片镜检[3],本项研究目的是通过支原体检测三种方法学比较,以评价超高倍显微镜应用于支原体活体检测的准确性及可行性,可为临床实验室生殖道病原体检测提供一个快速、准确、有效的检测技术。
1材料与方法
1.1 标本来源
研究对象为2007年5月-2009年8月来我院就医的男科和妇科患者共986例,其中男患者368例,女患者618例,年龄18-65岁,病例筛选具有支原体感染症状和体征,男性患者尿道口红肿,有水性黏液样分泌物,女性患者有宫颈糜烂、白带异常且阴道分泌物增多,符合临床诊断标准。
1.2标本采集
女性以无菌拭子取宫颈、阴道分泌物;男性取尿道分泌物,前列腺液置无菌试管中密闭保存,每位患者同时取两份,立即送检,一份用支原体培养法检测,一份用超高倍显微镜直接镜检。同时患者静脉采血2ml,用酶联免疫法检测抗体。
1.3仪器与试剂
1.3.1 上海大众公司DZ-510多媒体超高倍显微镜,放大倍数150～31000倍。分辨率为0.3um,无极变倍,可明暗视野相差观察并配有多媒体计算机,具有捕获测量存储回放查询打印等多功能。
1.3.2支原体培养法为法国梅里埃生物公司的支原体IST2。
1.3.3酶联免疫法为支原体抗体诊断试剂盒,由深圳市博卡生物技术有限公司提供。
1.4方法
1.4.1超高倍显微镜活体观察在清洁无菌玻片上加生理盐水0.1ml,用无菌棉签沾标本均涂置,加盖玻片,根据观察需要选择暗视野相差视野,在超高倍显微镜相差视野下直接观看,发现游离支原体包囊(内含不停泳动支原体)或上皮细胞上有支原体包囊附着或观察到白细胞、吞噬细胞内吞噬数量不等、大小不一、泳动活跃的支原体,即判为阳性。结果判断参照新编临床检验图谱〔4〕曹兴午拟订标准〔5〕。
1.4.2 支原体培养法患者标本严格按叶应妩等编著的《全国临床检验操作规程》,无菌操作采集后立即将拭子或液体样品200ul接种于解脲支原体、人型支原体液体培养基中,混匀,37℃温箱内孵育24h和48h,72h。读取瓶中尿素-精氨酸LYO2肉汤颜色的变化和反应杯值。24h内培养基由黄色变红并清澈透明为解脲支原体生长,即为阳性。48h后变红,表示人型支原体阳性。72h培养由红变黄并清澈透明表明生殖道支原体生长。黄色为阴性。
1.4.3酶链免疫ELISA间接法严格按操作说明书检测。
2结果
2.1 统计学处理采用X2检验
2.2培养法支原体阳性率41.89%(413/986),MCDMI支原体阳性率42.90%(423/986)。X2=2.17, P>0.05两种检测方法无显著性差异,见表1。
2.3培养法支原体阳性率41.89%(413/986),ELISA支原体抗体阳性率36.82%(363/986)。
3讨论与分析
本资料对照结果显示,解脲支原体是女性生殖道的重要致病菌之一〔6〕,超高倍显微仪法对泌尿生殖系统支原体检测与传统的培养法检测结果阳性阴性符合率有较好的一致性。培养法有高度特异性,可做为诊断的金标准,我们将培养阴性但超高倍法阳性标本,用酶链法检测有38例阳性,说明有可能标本菌量浓度低所致假阴性或有的患者用药时间长,产生耐药可能会影响阳性率,此方法仅可检出浓度大于10ccu/ml菌液,且周期长,一般需要3天以上才能报告结果;不适于临床快速诊断。
酶联法阳性,而培养法阴性者14例 ,原因可能是曾经感染现已痊愈的抗体所致 。培养法阳性,而酶联法阴性者64例 ,我们追踪检测培养法为阳性病例,显示为早期感染者,未产生抗体。酶联免疫法敏感性高,特异性强,与培养法比较P<0.05,两种检测方法有显著性差异.支原体属内种类繁多,有不同的支原体存在交叉免疫反应,有些支原体同种不同株抗原间存在异质性〔7〕。
以培养法作为金标准,超高倍显微诊断仪与培养法比较,经X2检验,(P>0.05),两法结果之间无显著性差异。超高倍显微仪活体检测法可直接镜检看到支原体、衣原体,不需要染色,可以快速诊断,且可以直观地看到感染的严重程度,可以同时观察到霉菌、滴虫、梅毒螺旋体、淋球菌线索细胞等多种病原体〔3〕,对多重混合感染的患者更能准确指导临床,这也是其他方法无法比拟的优点,超高倍显微分析检测仪直观准确,操作简便,信息管理方便,应用其多媒体技术可打印图像,存储信息,适用于各类发病人群及早期感染者,并指导临床用药及疗效观察,在诊断泌尿生殖道感染中有着重要的临床价值 ......
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