三种制备冷沉淀方法的比较
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[摘要]目的 通过对4℃恒温冰箱过夜(14-16h)法、水浴虹吸法和水浴离心法的分析比较,选择合适的制备冷沉淀的方法。方法 将用于制备冷沉淀的新鲜血浆无菌留样3ml,用血凝仪测其凝血因子Ⅷ(FⅧ)含量,根据检测的FⅧ含量不同将制备冷沉淀的90份原料新鲜血浆分为三组: A:FⅧ(80 IU-90 IU)、B :FⅧ(90 IU-100 IU) 、C: FⅧ>100 IU。A组随机分成3等份,B、C组同上。将A、B、C组各抽取1份分别用三种方法来制备冷沉淀。结果 三种方法FⅧ的含量(IU/袋)分别为: 82、89、98 ;合格率分别为:73.33%、93.33% 、100%; Fg的含量(mg/袋)分别为:215、221、225;合格率分别为:96.67%、100%、100% ; 结论水浴离心法能够制备出符合成分血质量要求的冷沉淀,合格率为100%,而4℃恒温冰箱过夜法和水浴虹吸法制备的冷沉淀合格率分别为73.33%和93.33%。水浴离心法制备的冷沉淀FⅧ含量要高于水浴虹吸法和4℃恒温冰箱过夜法。水浴离心法更适合用于制备冷沉淀。
[关键词]冷沉淀;FⅧ;Fg; 水浴离心法
[中图分类号] R457.1+4 [文献标识码] A [文章编号]
冷沉淀是由新鲜冰冻血浆(Fresh frozen plasma,FFP)制备而成的成分血,是FFP在4℃环境下融化后残留的白色沉淀物。冷沉淀是临床常用的成分血,其中含有丰富的的凝血因子,主要含有5种成分:FⅧ、 Fg、血管性血友病因子、凝血因子ⅩⅢ(FⅩⅢ)、纤维结合蛋白等。临床上主要用于甲型血友病,纤维蛋白原及凝血因子缺乏所致的出血性疾病的治疗 ,以及手术、创伤引起的凝血机制障碍的治疗。因此血站应为临床提供优质高效的冷沉淀,以保证其临床疗效、充分地发挥其重要功能。FFP内含有全部的凝血因子,包括不稳定FⅧ,FⅧ在体外的半衰期较短,多为8—12 h,其活性易丧失[1] 从而影响冷沉淀的质量。现将三种方法制备冷沉淀的质量情况报告如下。
1材料与方法
1.1仪器德国贺利氏6000 i容量冷冻离心机,热合机(韩国 SE 250),低温水浴融化箱(美国CYTO THERMCT.6C),CA50凝血酶仪(日本Sysemx )。
1.2 试剂德国Dade Behring Marburg公司生产(Oweren′s Veronal 缓冲液、FB试剂、APTT试剂、乏Ⅷ因子血浆和复合标准人血浆),上海太阳生物技术有限公司(0.025mmol/L 氯化钙溶液)。
1.3原料血浆采集400ml全血6 h内离心分离制备成新鲜冰冻血浆并无菌留样3ml,放入-80℃速冻箱速冻后,置入-50℃冰箱保存。
1.4 制备方法
1.4.1留样的血浆用血凝仪测其凝血因子Ⅷ(FⅧ)含量,根据检测的FⅧ含量不同将制备冷沉淀的90份原料新鲜血浆分为三组。见表1
从A组随机抽取6份B组随机抽取15份C组随机抽取9份共3组(a b c)每组30份
1.4.2 4℃恒温冰箱过夜法将a 组FFP置于4 ℃恒温冰箱过夜(14—16 h),待其融化成冰渣状后放入低温离心机中离心分离出上层血浆,剩余部分(25±5) ml即为冷沉淀,将冷沉淀迅速置于低温速冻冰箱内保存。
1.4.3水浴虹吸法 将b组FFP置于水温恒定在6℃的CT.6C型低温水浴融化箱内,空袋子则放在水浴箱外面用来承接融化了的血浆。水浴箱自动摇摆,血浆融化,上清液虹吸流入空袋,底部剩余白色絮状物,制得冷沉淀25±5 ml,将其快速置于低温速度冰箱中保存。
1.4.4水浴离心法 将c组FFP连同空袋一同置于水温恒定在6℃的CT.6C型低温水浴融化箱内,水浴箱自动摇摆,血浆融化,待剩少许碎冰块时,取出离心,分离出上层血浆,剩余部分(25±5) ml即为冷沉淀,将其快速置于低温速度冰箱中保存。
1.4.5FⅧ和Fg的检测方法按试剂说明书操作。
1.4.6 质量标准由200 ml FFP 制备的冷沉淀(1U):FⅧ含量≥80 IU/袋,Fg含量≥150 mg/袋,符合质量标准者为合格。
2 结 果
三种方法制备的冷沉淀FⅧ和Fg含量比较,见表2
三种方法制备的冷沉淀FⅧ和Fg合格率比较,见表3表4 ......
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