多奈哌齐与维拉帕米联合用药对大鼠阿尔茨海默病模型血液流变学的影响(2)
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2010年11月1日
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1.2方法
1.2.1制备模型：在脑立体定位仪(a Coretech Holdings Company)上， 将5 μl 1%甲苯胺蓝溶液用微量注射器注射到右侧海马区(前囟向后3.5 mm，中线右旁2.8 mm，硬脑膜下2.5 mm)，继之断头取脑，用10%甲醛固定6～7 h，将右侧脑矢状面切开，鉴定注射Aβ1-40的部位是否确切。位置鉴定确切后，于模型组、多奈哌齐组、联合用药组的大鼠右侧海马区上述部位注射凝聚态Aβl-40 5 μl制成AD模型。对照组只注射等量注射生理盐水，其余操作同上。所有操作均在相对无菌条件下进行。
1.2.2药物治疗：多奈哌齐组：按照大鼠剂量0.525 mg/kg将6.79×10-2mg/ml多奈哌齐溶液给予一次8 ml/kg体重灌胃；联合用药组：按照大鼠剂量分别为0.525mg/kg和3mg/kg将6.79×10-2mg/ml多奈哌齐溶液和3.82×10-1mg/ml维拉帕米皆给予一次8 ml/kg体重灌胃；对照组、模型组：将蒸馏水按照大鼠体重8 ml/kg灌胃。每日1次，持续28 d。
1.2.3观察项目：药物治疗后处死各组大鼠，腹主动脉采血，应用全自动血流变快测仪 FASCO-3010(重庆大学维多生物工程研究所)测定血液流变学的各项指标。
1.2.4统计学方法：实验数据以均数±标准差(χ±s)表示，采用SPSS13.0统计软件进行处理，P<0.05表示差异具有统计学意义。
2 结果
对照组、模型组、多奈哌齐组及联合用药组全血粘度的高切及低切值、血浆粘度等指标测定结果见表1。
3讨论
AD的主要病理变化是脑神经细胞外出现β-淀粉样蛋白(Aβ)聚集形成的老年斑，脑神经细胞内tau蛋白异常聚集形成的神经原纤维缠结(neurofibrillary tangle，NFT)，脑皮质细胞减少以及累及皮质动脉和小动脉的血管淀粉样变性。海马是对缺血性改变和Aβ毒性作用甚为敏感的部位，因此，选用海马注射毒性药物是传统使用的复制AD模型的方法[3]。关于AD的病因与疾病的发生发展机制各国学者提出多种假说，主要有Aβ沉积学说、遗传学说、自由基学说、炎症和免疫学说、铝中毒假说、胆碱能学说、病毒学说、钙超载学说、tau蛋白产生异常磷酸化、雌激素的水平降低、缺氧等，但还没有一种能够圆满的解释所有AD病理现象及发生发展过程。
基于不同的假说，产生了多种通过不同途径治疗AD的药物。多奈哌齐作为乙酰胆碱酯酶抑制剂(CHEIs)，在AD治疗中已得到广泛应用，其机制是通过增加突触处的内生性Ach数目来增强中枢胆碱能的活性[4]以及高度选择性的长时间的抑制中枢神经系统的乙酰胆碱酯酶，且没有外周作用，能够提高中枢神经系统，特别是大脑皮质和基底节神经突触中乙酰胆碱浓度，同时抑制氧自由基的产生，加快Aβ的代谢从而减少细胞调亡和炎症的发生，有效阻止AD神经元的继续丢失，缓解AD患者记忆力下降和认知功能障碍的临床症状。多奈哌齐为脂溶性药物，有实验结果表明，在一定时间内进入脑内的药量与排出脑内的药量维持着动态的平衡，说明脑内存在着运载多奈哌齐排出脑组织的载体，随着时间的延长，最终使脑内的药量减少。目前已知一类重要的药物载体为存在于血脑屏障(BBB)的毛细血管内皮细胞膜中的一类蛋白P-gp(P-glyco-protein)，可主动将一些细胞毒性药物排出胞外。有学者经过比较多种药物透过脂膜的程度，认为：由于P-gp的存在，脂溶性高的药物未必都易透过BBB。多奈哌齐由脑内外排的过程中P-gp或其他未知的转运载体可能起到了重要作用[5]。维拉帕米是一种作用于慢通道的Ca2+拮抗剂，对心脏有负性作用，能舒张血管，并抑制Ca2+内流，减轻Ca2+超负荷对红细胞的损伤，广泛用于治疗心血管疾病。近年来有不少文献报道其对AD模型的脑保护作用。维拉帕米还是最广泛使用的P-gp抑制剂，通过抑制P-gp或绕过P-gp可以增加脑组织对药物的吸收[6]。
本研究结果表明模型组大鼠的血液流变学与对照组比较，有显著的异常改变，说明AD的发生、发展对血液流变学有一定的影响。其中全血粘度有显著差异。全血粘度高会引起微循环滞留时间延长，易致微血栓形成，故血粘度增高是患AD的危险因素之一。红细胞刚性指数也有显著性改变，其刚性指数升高使红细胞变形能力减弱，引起脑组织等部位血流速度减慢，促进脑血栓形成，加重脑组织损害[7]。多奈哌齐组和联合用药组与对照组的全血粘度、红细胞刚性指数比较虽无显著性差异，但联合用药组的疗效显著优于多奈哌齐组，可能与维拉帕米的扩血管和保护红细胞的作用以及增加脑组织对多奈哌齐的吸收有关。红细胞压积等其他指标，多奈哌齐组与联合用药组比较无统计学差异，但后者在数值上优于前者，说明多奈哌齐与维拉帕米联合用药能改善AD大鼠的多项血液流变指标。
参考文献
[1] 郁向静,何俊民.β淀粉样蛋白在阿尔茨海默病中的病因学作用.广州医药,2007,38:2.
[2] 王向阳.中医对阿尔茨海默病病因病机研究近况.内蒙古中医药,2008,(12):62.
[3] 葛维明,刘俊恒,李爱民,等.颅内注射Aβ1-40单抗对阿尔茨海默病大鼠模型疗效的实验观察.江苏预防医学,2008,9:19.
[4] Kasa P,Papp H,Kasa P Jr ......
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