上皮性卵巢肿瘤中PHLPP表达分析
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[摘要] 目的 探讨免疫组织化学在上皮性卵巢癌病理诊断中的应用。方法 对119例上皮性肿瘤标本，采用免疫组织化学方法检测肿瘤病灶的PHLPP表达情况。结果 PHLPP在良性卵巢肿瘤、交界性卵巢肿瘤、卵巢癌中表达率存在统计差异(P<0.01)。结论 PHLPP探索卵巢癌发生发展机制,对提高卵巢癌防治水平和改善预后,有极为重要意义。
[关键词]免疫组织化学； 上皮性卵巢癌； 表达
[中图分类号] R737.31[文献标识码] B[文章编号] 1005-0515(2011)-02-241-01
(domain leucine一rich repeat protein phosphatase)基因是一种富含亮氨酸的蛋白激酶,与肿瘤发生发展密切相关。本研究以免疫组织化学方法检测上皮性卵巢肿瘤中PHLPP的表达情况,探讨其与卵巢癌的相关性,为卵巢癌的诊断和预后评估寻找新的生物学指标。
1 资料与方法
1.1 一般资料选取我院2005年10月～2010年10月住院并行手术治疗的卵巢上皮性肿瘤标本共119例,最小年龄31岁,最大年龄69岁,平均年龄(45.6±2.3)岁,所有患者均为首次进行手术,术前均未接受放疗与化疗,术后经病理确诊。其中良性肿瘤40例作为良性组,交界性肿瘤40例作为交界性组,恶性肿瘤39例作为恶性组。上述组织标本均固定于10%的福尔马林固定液中,经取材、脱水、透明、浸蜡、包埋后切片,切片厚为4μm,烤干后备用。
1.2 方法 PHLPP抗体购自美国Abgent抗体公司。应用免疫组化S-P法进行染色,操作按SP试剂盒说明书进行:石蜡切片常规脱蜡、水洗;柠檬酸盐95℃热修复5min后,室温冷却;PBS洗涤5min 3次;阻断剂去内源性过氧化酶,室温15min;PBS洗涤5min 3次;加封闭液室温封闭15min;滴加一抗4℃过夜;PBS洗涤5min 3次;滴加第二抗,室温15min;PBS洗涤5min 3次;滴加辣根过氧化酶标记的链霉菌抗生物素蛋白室温15min;PBS洗涤5min 3次;滴加显色剂DAB,光镜下观察,显色适当后用水终止;Mayer苏木素复染细胞核,水洗;弱氨水返蓝,水洗;梯度酒精脱水;透明、中性树胶封片,显微镜下观察。以PBS液代替一抗作为阴性对照,以试剂盒中所附已知的阳性染色切片作为阳性对照。
1.3 结果判定以细胞浆棕黄色染色为阳性细胞。每张切片均随机选取5个高倍视野(10×40倍),计数200个细胞/视野,共计1000个。根据阳性细胞显色的比例及染色强度,做半定量判定。计数光镜下观察阳性信号呈棕黄色,视野位置不存在交叉。按显色程度评分:未着色或与背景一致为0分,浅黄色为1分,棕黄色为2分,黄褐色为3分。按阳性细胞占全部细胞的比例并记分,其阳性细胞率评分标准为:阳性细胞个数/全部滋养细胞百分比,<5%为0分,5%～25%为1分,26%～50%为2分,51%～75%为3分,>75%为4分。然后将两种评分相加,分为4级:0～1分为阴性(-),2～3分为弱阳性(+),4～6分为阳性(++),>6分为强阳性(+++)。
1.4 统计学分析采用Spss13.0统计学软件进行数据处理,计数资料采用χ2检验,以P<0.05为有统计学差异。
2 结果
PHLPP在良性卵巢肿瘤中高表达,表达率为92.5%,在交界性卵巢肿瘤中表达率为75.0%,在卵巢癌中表达率最低为25.6%,各组相比较有统计学差异(χ2=69.0900,P<0.01)。见表1。
表1PHLPP在上皮性卵巢肿瘤中表达情况
3 讨论
卵巢癌是严重威胁妇女健康的常见恶性肿瘤,由于其发病的隐匿性,缺乏特异性症状和有效的早期诊断手段,70%患者发现时已有盆腹腔转移、卵巢癌浸润,已属晚期[1]。主要的治疗方法是手术、化疗、放射治疗、内分泌治疗以及综合治疗,但卵巢癌的整体生存率并没有得到很大的改善,其5年生存率也仅为30%左右,预后差。因此,探索卵巢癌发生发展机制,对提高卵巢癌防治水平和改善预后,有极为重要意义。
肿瘤的形成是一个复杂的过程,需要多事件多因子的参与,其发生涉及癌基因活化和抑癌基因失活的多步骤变化过程,卵巢癌的发生也不例外。PI3K/Akt(phospho inositide 3kinese/proteinkinase B,PI3K/Akt)通路发现已有十几年的历史,在很多肿瘤细胞系中均可检测到通路抑制基因的变异或缺失,PI3K和Akt的突变或扩增、受体激活或PI3K/Akt通路下游分子的激活。PI3K/Akt通路在细胞代谢、细胞周期调控、血管生成等方面发挥重要作用,与肿瘤的发生、发展、转移、治疗耐药性密切相关。PHLPP是Newton[2]等发现的新的抑癌基因,在人体各组织器官及细胞中均可以表达。抑癌基因PHLPP在调节肿瘤细胞的生长、分化、凋亡、浸润、转移和肿瘤血管生成等各方面均具有重要作用。PHLPP通过使Akt的疏水基团在Ser473位点去磷酸化,从而实现对Akt及其下游激酶的活性的负调控,拮抗PI3K/Akt信号系统,影响细胞信号转导,影响肿瘤细胞的增殖、分化与诱导细胞凋亡,从而发挥抑癌作用[3]。近年对乳腺癌、胃癌、前列腺癌的转移灶进行检测[4],发现Akt过度活化及PHLPP表达明显下降。Newton等检测了5种结肠癌细胞系,其中有4种检测到PHLPP低表达而Akt高表达,将PHLPP转染到结肠癌细胞系,与未转染的相比出现了部分位点低磷酸化。本研究提示PHLPP在良性卵巢肿瘤中表达率最高,在卵巢交界性肿瘤和卵巢癌中表达显著降低,在卵巢癌中表达率最低,各组相比较有统计学差异(χ2=69.0900,P<0.01)。这提示卵巢癌发生过程中存在PHLPP蛋白的缺失。
总之，免疫组织化学在上皮性卵巢癌病理的诊断 ......
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