心肌肌钙蛋白免疫荧光干式定量检测系统性能评价
 |
| 第1页 |
参见附件(2554KB，2页)。
[摘要] 目的 评价心肌肌钙蛋白免疫荧光干式定量法检测心肌肌钙蛋白的性能。方法 应用心肌肌钙蛋白免疫荧光干式定量法测定血清cTnI水平，内容包括批内重复性、线性、准确度。结果 该法重复测定高、低值样本，CV<10%；线性回归方程 y= 1.0352x-0.1792，r=0.998；与贝克曼ACCESS 2免疫分析系统全自动化学发光法的相关性分析，r=0.995。结论 心肌肌钙蛋白免疫荧光干式定量法检测cTnI用于诊断AMI具有操作简便、结果准确可靠、自动化程度高，且检测快速等优点，适合在临床工作中推广应用。
[关键词] 心肌肌钙蛋白免疫荧光干式定量法； 肌钙蛋白I； 全自动化学发光法
[中图分类号] R446.1[文献标识码] B[文章编号] 1005-0515(2011)-07-297-01
心肌肌钙蛋白I(cardiac troponin I，cTnI)测定方法的标准化、检测系统相对固定及质量控制措施的不断完善，2000年，欧洲心脏病学会(ESC)与美国心脏病学会(ACC)对AMI进行了重新定义，联合发表了新标准，确定cTnI为AMI诊断的首选心脏标志物，以cTnI取代CK-MB作为评价心肌坏死和诊断心肌梗死“金标准”[1]。定量的cTnI检测在临床上已经广泛应用，但在临床应用过程中发现各种方法之间差异很大，为了解该试剂盒在临床应用中的实际效果，本研究从批内重复性、线性及准确度等三个方面对该检测系统进行初步评价。
1 材料与方法
1.1 仪器与试剂 采用i-CHROMA_Reader的心肌肌钙蛋白免疫荧光干式定量检测系统及配套试剂，贝克曼ACCESS 2免疫分析系统及配套试剂，该参照系统检测心肌肌钙蛋白I近三月内室内质控稳定，最近一次参加卫生部室间质评PT成绩为100。比对前做好仪器维护及校准，检测期间室内质控在控。
1.2 标本来源 2011年在横县人民医院已确诊AMI患者共98例，其中男性63例，平均年龄61.5±5.6岁，女性36例，平均年龄63.2±3.8岁。抽取患者EDTA-K2抗凝血4ml，分离心分离血浆，将血浆分装为两管，一管用贝克曼ACCESS 2免疫分析系统测定，同时另一管用心肌肌钙蛋白免疫荧光干式定量系统检测，两组检测均在2h内完成。
1.3 测定方法 i-CHROMATM cTnI的检测原理是免疫荧光快速定量检测技术，干化学层析方法。即将血液样本与检测缓冲液进行混合，缓冲液中的荧光标记抗-cTnI抗体与血液中cTnI抗原结合形成抗原抗体复合物，当该复合物被加入到试剂盒的反应板上并通过毛细管作用扩散到硝化纤维基质的测试带上被测试带上的抗-cTnI抗体所捕获。因此，血液样本中cTnI抗原越多，测试带上复合物聚积越多，荧光抗体信号强度反应了被捕获的cTnI数量，通过i-CHROMA Reader 免疫荧光分析仪检测血液样本中的cTnI浓度。
1.4 评价标准
1.4.1 试剂批内重复性评价：选取高、低值标本各1例，重复测定2O次，以变异系数CV%≤10%符合要求。
1.4.2 线性范围评价：选取低值和高值两份CRP血清，用本检测系统测定3次，得CRP均值分别为1.7ng/mL、15.6ng/mL，然后按照3:1、2:1、1:1、1:2、1:3，制备成不同浓度样本，将各混合样本测定2次，取测定平均值与理论值计算相关系数r，以r≥0.995为符合线性评价要求。
1.4.3 准确度评价：按照EP9-A2[2]文件的要求选取cTnI>1.6ng/mL的新鲜样本，连续测定5d, 每天测定8份样本, 总共测定40份。每天将所选取的样本分成2等份，一份用本检测系统检测，另一份用贝克曼ACCESS 2免疫分析系统(全自动化学发光法)测定，每份样本测定两次,第1次按照1→8的顺序，第2次按照8→1的顺序测定，所有测定在2h内测定完毕。对两个检测系统的检测结果进行相关性分析，以相关系数r≥0.975(或r2≥0.95)为符合要求。
1.5 统计学处理 应用Microsoft Office Excel 2003进行统计学处理。
2 结果
2.1 批内重复性 测定其中高值X=10.83，CV=8.9%、低值X=1.51，CV=8.5%。结果显示该法精密度较好，符合CV<10%的试验设计要求，结果见表1。
表1 批内重复性测定结果 (ng/mL)
2.2 线性检测 测定结果见表2，回归方程为y= 1.0352x-0.1792(Y为测定值，X为理论值)，r2=0.9969，显示其在1.7～15.6ng/mL范围内呈良好的线性关系，见图1。
表2CRP线性测定结果(ng/mL)
图1cTnI线性测定结果(ng/mL)
2.3 准确度 测定结果表明，以金标法所测结果为Y，免疫速率散射比浊法所测结果为X，并对所测结果做直线回归分析 y=1.0212x-0.1232，r=0.995，b=0.1232，提示两者呈良好的相关性，见图2。
图2准确性测定
3 讨论 cTnI在AMI发病后迅速释放入血，胸痛后4～8 h升高，14～36 h达峰值，持续时间为3-7d，血中浓度可高达100～300 g/L[3]。因其在心肌损伤中具有特异性好和灵敏度高的特点，1999年欧洲心脏病学会(ESC)和美国心脏病学会(ACC)联合发表文件建议将cTnI的异常变化作为诊断AMI的必要条件[4]。
cTnI最早以RIA进行检测，使用多克隆抗体，交叉反应较多，分析灵敏度为10ng/mL，耗时达24-36h。后来采用IRMA和ELISA法，使用单克隆抗体，提高了灵敏度和特异性，分析灵敏度可达0.1ng/ml，但检测的CV仍较大，耗时长。目前常用全自动化学发光免疫分析法(ACLIA)。ACLIA法使用单克隆抗体，以全自动检测设备取代手工操作，使检测的重复性和可靠性大幅提高，分析灵敏度可达0.01ng/ml，且检测耗时短，一般都可在20 min内完成样品cTnI检测。心肌损伤标志物的检测周转时间(TAT)对于心肌损伤患者的及时诊断和治疗非常重要。1999年以来的重要文件大都要求检测心肌损伤标志物时从标本采集到医生得到检测报告的TAT≤1h。2002年的ACC/AHA文件更进一步要求心肌损伤标志物TAT最好能≤0.5h，床边检测(POCT)系统即是cTnI快速检测方法发展的另一个方向。它可在急诊室、病房直接开展cTnI检测，使用全血标本。由于减少了中间步骤，仪器检测时间仅需约10 min，从而将由取血到出报告的时间大为缩短[5]。
本试验结果从批内重复性、线性、准确度三个方面表明心肌肌钙蛋白免疫荧光干式定量法测定血浆cTnI的结果准确可靠。cTnI是敏感、特异的心肌标志蛋白，对心肌损伤，特别是AMI的诊断、治疗监测和预后评估均具有重要临床价值 ......
您现在查看是摘要介绍页，详见PDF附件(2554KB，2页)。