不同检验方法对慢性肝病的检验结果分析
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[摘要] 目的 分析不同检验方法对慢性肝病的检验结果。方法 对我院2011年2月至2011年11月间收治的85例HBsAg、HBeAb双阳性慢性肝病患者进行PCR定量检测、血清HA检测、HBsAg-ELISA检测。结果 PCR定量检测、血清HA检测、HBsAg-ELISA检测的检出率分别为95.29%、70.59%和49.41%，PCR定量检测的检出率明显高于血清HA检测及HBsAg-ELISA法，差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 PCR定量检测的灵敏度明显高于ELISA法与血清HA检测，是慢性肝病的检测的有效方法，值得在临床推广应用。
[关键词] 慢性肝病； PCR定量检测； 血清HA检测； HBsAg-ELISA检测
[中图分类号] R575 [文献标识码] B [文章编号] 1005-0515(2012)-02-205-01
在我国，慢性肝病的发病率居传染性疾病的首位，严重危害了人民群众的身体健康。而对临床治疗慢性肝病以及进行预后评估而言，实验室诊断结果发挥了至关重要的作用。通过实验室检测结果可以直接判断HBV病毒的复制程度、监测抗病毒治疗的效果。为了准确判断乙肝患者的病毒感染复制情况，降低临床漏诊率，本文对我院2011年2月至2011年11月收治的85例HBsAg、HBeAb双阳性慢性肝病患者进行三种不同检测方法的检测结果比较，以寻找最佳的检测方法，现将结果报告如下：
1 资料与方法
1.1 一般资料 选择我院2011年2月至2011年11月收治的85例HBsAg、HBeAb双阳性慢性肝病患者，其中，男性51例，女性34例，年龄21-67岁，平均年龄38.2岁。慢性肝病的诊断符合《病毒性肝炎防治方案》。入择患者均为HBV单独感染患者，且排除了免疫耐受状态下的HBV感染者。
1.2 方法 PCR定量检测为实时荧光定量检测，具体操作过程包括模板提取、反应体系配置、PCR扩增以及结果分析过程。核酸模板提取过程为，首先分别取100μl检测样本、阳性对照及阴性对照，各加入试剂A100μl，在震荡仪上混匀10s，后使用离心机，选择8000g/min的离心力将样本离心15min，弃去样本上清。继而，加入试剂B25μl，在震荡仪上混匀10s，置于100℃水浴锅内加热10min，后使用离心机，选择8000g/min的离心力将样本离心3min。所得样本备用，样本必须在1h内使用。反应体系配置过程为，首先根据待检样本的数量准备试剂，取36μl HBV-cccDNA反应液、6μl MgCl2+、6μl荧光探针、4μl Taq酶加入同一离心管中，在震荡仪上混匀10s，将离心管低速离心后进行分装，按每管体积为26μl。然后将带测样本与校准品分别取4μl加入反应管中，混匀后放入荧光定量PCR仪进行PCR反应。PCR检测程序为50℃1min，95℃5min进行预变性，循环条件为93℃30s，60℃60s循环次数设置为40次。最后进行结果判断，D值小于38即判断为阳性。HBeAg-ELISA检测方法采用全自动酶标仪测定方法。血清HA测定采用上海海研所实际盒，按说明书进行检测。将血清HA≥120μg/L即为异常值。
1.3 统计学方法 运用统计学软件对数据进行处理，计数资料采用卡方检验，P<0.05为差异具有统计学意义。
2 结果 对我院2011年2月至2011年11月间收治的85例HBsAg、HBeAb双阳性慢性肝病患者进行PCR定量检测、血清HA检测、HBsAg-ELISA检测的检出率分别为95.29%、70.59%和49.41%。PCR定量检测的检出率明显高于血清HA检测及HBsAg-ELISA法，差异具有统计学意义(P<0.05)，见表1。
表1 三种检验方法检测慢性肝病结果比较
*与血清HA检测、HBsAg-ELISA检测相比，P<0.05差异具有统计学意义。
3 讨论 在我国，慢性肝病的发病率居传染性疾病的首位，严重危害了人民群众的身体健康。因此，尽早发现HBV病毒携带者并且预防HBV病毒在人群中传播是一项非常重要的工作。临床研究显示HBeAg与HA关系十分密切，HBeAg阳性与HA异常成正比关系。但在临床检验过程中，其在慢性肝病中的检出率却往往不高。而临床检验常采用的HBeAg-ELISA检测可以检出低浓度的HBeAg阳性患者[1]。对乙型肝炎患者而言，隐性以及低浓度HBeAg的乙肝病毒感染的检出是防止漏检率发生的关键[2]。
近年来，医学人员运用分子生物学诊断技术对肝脏疾病进行诊断。PCR技术，即聚合酶链反应技术，是体外扩增特定DNA片段的一种快速的检测方法，常与凝胶电泳联合使用。目前，PCR技术的应用范围十分广泛，具有快速、准确的优点。PCR的基本原理为依靠加热变性使双链DNA形成单链，作为反映体系中的DNA模板；然后降低温度，使引物与模板上DNA互补序列退火。继而再次升高温度 ......
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