HSP70和P27在食管鳞癌中的表达及其临床意义
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【摘要】目的：探讨HSP70和P27在食管鳞状细胞癌中表达之间的相关性。方法：采用SP免疫组化染色检测65例食管鳞癌组织，30例正常食管组织，及30例瘤旁组织中HSP70和P27。结果：正常食管上皮、癌旁组织、食管鳞癌中HSP70的阳性表达率分别是16.67%(5/30) 、46.67%(14/30)、86.15%(56/65)，正常食管上皮、癌旁及食管鳞癌中P27的异常表达率分别是96.67%(29/30)、53.33%(16/30)、41.53%(27/65)，在食管鳞癌中， HSP70和P27的表达呈负相关(rs＝-0.541，P＝0.000)。结论：在食管癌中，P27可能随着HSP70表达的上调而下降，其表达率与多个临床病理指标相关。
【关键词】食管鳞癌；HSP70；P27；免疫组织化学
【中图分类号】R426【文献标识码】A【文章编号】1005-0515(2011)03-0290-01
热休克蛋白(HSP)是生物体或离体的培养细胞在不良环境因素作用下所产生的一组特殊的蛋白质，它能保护机体或细胞不受或少受伤害，由于分子量为70KD的热休克蛋白诱导型在正常细胞中水平较低，而在应激状态下可显著地升高[2]，因此成为热休克蛋白中最为关注、研究最深入的一种。P27是一种重要的细胞周期蛋白激酶抑制蛋白(CKI)家族成员，其主要功能是作为细胞周期素依赖性蛋白激酶(CDK)抑制因子参与细胞周期调控。P27蛋白表达下调导致其对细胞周期进展抑制不足[3]。进而影响细胞的增殖，同时有研究表明P27可作为凋亡启动子诱导细胞凋亡，它与肿瘤的发生密切相关。HSP70和P27在参与细胞增殖及细胞凋亡方面存在一定关系。本文重点研究HSP70和P27在食管鳞癌中的表达情况及两者之间的相关性。
1 材料和方法
1.1 临床资料：本实验的标本来自2009年6月~2010年12月新乡市中心医院胸瘤一科食管鳞癌根治切除病例。以临床病理资料完整的65例食管鳞癌病例，30例癌旁(距肿瘤中心3cm)病例为研究对象；同时选择30例食管鳞癌切除标本上、下断端(距肿瘤>5cm)的正常食管上皮作为正常对照组。
1.2标本处理标本处理将新鲜的标本固定于10% 中性甲醛液内，常规梯度乙醇脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，切片厚度5um。
1.3免疫组织化学染色：
1.3.1 免疫组织化学试剂鼠抗人HSP70单克隆抗体(RAB-0097，克隆系4A2C7，IgG分类：IgG1)：鼠抗人P27单克隆抗体(MAB-0242，克隆系：DCS-72.F6，同种型：IgG)美国Santa Cruz公司产品，购自福州迈新生物技术有限公司。通用型SP-9000检测试剂盒及DAB显色试剂盒(ZLI-9017)美国Maxim公司产品，购自福建迈新生物技术有限公司。
1.3.2 免疫组织化学染色严格按照试剂盒操作，阳性对照：采用福州迈新生物技术有限公司提供的阳性对照片。阴性对照：以PBS代替一抗作为空白阴性对照。
1.4数据统计学处理：数据采用SPSS12.0软件包(SPSS Inc，Chicago，USA)进行统计学分析。HSP70和P27蛋白表达之间的相关性采用Spearman等级相关分析。一般以P<0.05为差别有统计学意义(双侧)。
2 结果
HSP70阳性产物主要位于细胞核和细胞浆内。在正常食管上皮组织中HSP70多为胞核胞浆同时表达(7/30)，在食管癌旁组织中，HSP70部分呈阳性表达(14/30)，主要位于细胞核，部分在细胞浆内也可见表达。食管癌癌肿组织中HSP70阳性产物大多数呈棕黄色细颗粒状，位于细胞核和胞浆内(56/65)。癌巢内不同癌细胞之间HSP70表达有明显的异质性，染色强度以棕黄色为主，差别不大。
P27阳性产物在正常食管上皮组织中，大多数呈细颗粒状弥漫分布于胞核，胞浆内也可见表达(29//30)，瘤旁组织中大多为核表达(16/30), 食管癌组织中P27阳性产物大多数呈细颗粒状弥漫分布于胞核27/65。配对四格表的检验显示，HSP70和P27在癌组织中的表达有关系(P＝0.003)，结合Spearman等级相关系数及p值(rs＝-0.541，P＝0.000)，可认为二者在食管鳞癌组织中的表达关系比较密切，呈负相关关系。食管鳞癌组织中，HSP70和P27的表达程度之间有负相关关系(rs -0.527 P 0.035)且随表达程度的增高而增加。
3 讨论
HSP70作为最主要的热休克蛋白之一，不仅在细胞生长、发育、分化、蛋白合成、基因转录等功能方面发挥重要作用，而且通过调控细胞周期所必需的蛋白构象参与肿瘤细胞的增殖、凋亡过程。在多种肿瘤中，HSP70都可检测到高表达，并且通过哺乳类细胞的动物实验，发现其有助肿瘤的形成，这一特性可能是因HSP70作为分子伴侣的多向亲和性，改变在肿瘤形成中的细胞周期构成蛋白激酶及关键蛋白的活力，而这一异常过程又需大量HSP70来调节，因而呈持续高表达。
P27直接参与细胞的生长抑制、分化等调控过程[4]。在多种肿瘤中，P27与增殖状况无关，提示它的主要作用是在细胞分化、细胞调亡的调节过程中。研究表明: P27很少或不发生基因突变, 其对细胞周期的调控主要依赖于其蛋白的表达水平及活性的改变[5]。
Kingston等[6]研究得出结论：HSP70参与原癌基因c-myc的表达，HSP70可与c-myc结合调节其转录活性，HSP70基因产物能促进c-myc基因的表达。而c-myc原癌基因是与细胞增殖凋亡有密切关系的基因。它不仅能促进细胞增殖和恶性转化，而且可以抑制细胞的分化。
目前有研究发现,c-myc基因可通过激活端粒酶催化亚基(hTERT)和端粒酶，影响端粒的稳定性进而促进细胞永生化。c-myc激活可下调P27蛋白水平,并可上调CDK2的表达，抑制P27与新形成的cyclinE-CDK复合物结合，新形成cyclinE-CDK2复合物又可通过正反馈使P27蛋白磷酸化，使其从原有cyclinE-CDK2-P27复合物中解离出来[6]。
综上所述，HSP70与肿瘤的发生密切相关，尤其HSP70表达与细胞的增殖以及细胞凋亡关系的研究越来越受到人们的重视，p27作为细胞周期抑制因子，被认为是一种肿瘤的抑制基因，p27与HSP70在食管鳞癌中的表达呈负相关。两者关系的研究对于食管癌的预防、早期诊断和基因治疗有着广泛的前景。
然而，目前对两者相关关系的研究尚处于初级阶段，p27在细胞凋亡中的作用机制也尚未完全明确，相信随着对HSP70和p27基因的进一步研究，必将给肿瘤的诊断和治疗带来新的发展。
参考文献
[1] Morimoto,TSOKOS GC.Heat shock protein 70 kDa:molecular biology biochemistry,and physiology ......
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