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编号:12287612
六盘山蕨菜多糖红外分析
http://www.100md.com 2011年9月1日 朱溶月
    参见附件(12kb)。

     (兰州大学药学院甘肃 兰州 730000)

    【摘要】目的:提取分离纯化具有抗氧化作用的蕨菜多糖,并对其进行红外鉴定,以初步确定蕨菜多糖的一级结构。方法:水提醇沉得蕨菜粗多糖,用Sevage法(氯仿:正丁醇=4:1)除蛋白。再加无水乙醇使含醇量达到80%,静置过夜,5000r/min离心10min,残渣依次用体积分数95%乙醇、无水乙醇、丙酮、乙醚多次洗涤,冷冻干燥,得精制多糖,红外分析蕨菜多糖。结果结论:经红外分析后初步推测具有抗氧化作用的蕨菜多糖一级结构是具有β-D(1、4)连接的吡喃葡聚糖主链。

    【关键词】六盘山蕨菜;多糖;红外分析

    【中图分类号】R217.24 【文献标识码】A 【文章编号】1005-0515(2011)09-0166-02

    蕨菜属羊齿科,多年生草本植物,别名如意菜、拳头菜等,是六盘山林区和山区常见的一种山野菜。蕨菜多糖具有多种生理活性[1],表现出强的抗氧化活性。而且蕨菜生长周期短,适宜人工栽培,便于采集和加工,生产成本低。因此,蕨菜在医药和保健食品等方面极具开发潜力[2]。本文利用水浴回流提取、乙醇沉淀多糖、Sevage法去除蛋白质等工艺提取粗多糖;将得到的粗多糖通过有机溶剂离心洗涤,冷冻干燥进行分离纯化,收集得到精制多糖[3];采用紫外分光光度计、红外光谱仪对多糖结构进行初步的光谱分析。以期能够为利用六盘山蕨菜植物资源奠定理论基础[3]-[8]

    1 材料与方法

    1.1材料与仪器

    蕨菜:采自六盘山区,80℃烘干,粉碎过80目药典筛。

    试剂(分析纯):葡萄糖,硫酸,苯酚,氯仿,无水乙醇,正丁醇,过硫酸钾,ABTS等。

    仪器:红外分光光度计,UV7501紫外可见分光光度计,高速离心机,冷冻干燥器,索氏提取器

    1.2 试验设计

    1.2.1 蕨菜多糖的提取[9] -[10]

    称取干燥粉碎后的蕨菜细粉20g,置索氏提取器中,依次用石油醚提取至提取液无色为止。残渣挥干溶剂后,加入200ml蒸馏水回流提取2h,趁热过滤,重复3次。合并滤液,减压浓缩至原体积的1/2后,用4倍量的无水乙醇沉淀过夜,5000r/min离心10min,沉淀冷冻干燥为粗多糖。

    1.2.2 蕨菜多糖的精制:将粗多糖加100ml热水溶解,用Sevage法(氯仿:正丁醇=4:1)法除蛋白质;浓缩多糖溶液,加入无水乙醇使含醇量高达80%,静置过夜,5000r/min离心10min,沉淀依次用95%乙醇、无水乙醇、丙酮、乙醚多次洗涤,冷冻干燥,得到精制多糖。

    1.2.3 多糖含量得测定:采用苯酚-硫酸法。

    1.2.4 结构分析[11] -[13]

    1.2.4.1 紫外光谱分析:用紫外光谱扫描仪对多糖组分进行扫描, 测定蕨菜多糖的紫外吸收光谱。

    1.2.4.2 红外光谱分析[14]:取1 mg 左右经干燥的多糖样品, 与100 ~ 200 mg 经干燥的KBr 粉末在玛瑙研钵中轻轻研磨均匀, 在红外灯下操作. 经压片机压成薄片, 随即上机测定, 于4 000 ~ 400 cm-1红外光谱仪扫描。

    2 结果与分析

    2.1 蕨菜多糖的提取结果:蕨菜粗多糖为浅灰色,无味。易溶于水,热水中溶解度增大。不溶于丙酮、乙醚等非极性溶剂。干燥粉碎后的蕨菜细粉20g按法提取得到多糖1.248g,最终测定多糖得率为6.24%。

    2.2 紫外光谱分析:我们在蕨菜多糖的紫外吸收光谱的260nm和280nm处未观察到任何吸收峰;而此处的吸收峰主要是核酸和蛋白质[15],所以我们确定用Sevage法除蛋白后的蕨菜多糖中不含核酸、蛋白质。

    2.3 红外光谱分析:根据图(1)我们在蕨菜多糖的红外吸收光谱中,发现在3600-3200cm-1, 3000-2800cm-1, 1400-1200cm-1, 1200-800cm-1,均有多糖特征峰;在891 cm-1处的吸收峰表明多糖结构中存在β吡喃糖苷键 ......

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