时间分辨荧光免疫分析技术(TRFIA)检测乙肝HBsAb浓度中的应用
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【摘要】目的：调查时间分辨荧光免疫分析技术(TRFIA)在乙型肝炎血清学标志物检测中的应用情况。方法：采用芬兰Wallac 1420时间分辨荧光免疫分析仪,试剂为上海新波乙型肝炎定量试剂对本院5890例经过新生儿期的常规乙型肝炎疫苗接种后1至3岁的幼儿(未进行乙型肝炎疫苗加强)血清用TRFIA检测HbsAb，看经过新生儿期的常规乙型肝炎疫苗接种后HbsAb浓度产生的情况。在3岁加强针后检测HbsAb浓度有明显的上升。结果： 1至2岁的幼儿HbsAb浓度产生的情况比2至3岁的要好，1-2岁左右的儿童的HbsAb>100mU/ml的占39.5%；2-3岁儿童的HbsAb>100mU/ml的占17.8%；3-4岁加强后的儿童HbsAb>100mU/ml的占36.6%。也就是说在经过新生儿期的常规乙型肝炎疫苗接种后HbsAb浓度在2岁后有一个较明显的下降，加强一针后HbsAb浓度有明显的上升。结论：时间分辨荧光免疫分析技术检测乙型肝炎HbsAb浓度的高低可作为预防乙型肝炎病毒能力的一种常规方法。也建议幼儿在2岁左右进行一次乙型肝炎HbsAb浓度检测，了解自身的HbsAb浓度以便及时进行疫苗加强。
【关键词】时间分辨荧光免疫分析；乙型肝炎病毒
【中图分类号】R701.26 【文献标识码】B 【文章编号】1005-0515(2011)10-0248-02
乙肝病毒(Hepatits B veiusHBV)感染是我国最常见的感染性疾病之一，而应用免疫技术测定HBV特异性抗原抗体是HBV感染诊断的主要手段。由于免疫学技术的不断发展，抗原抗体检测灵敏度明显提高，使低水平HBV感染得以检出，对临床诊断及流行病学有重要意义[1] 。 时间分辨荧光免疫分析技术(time resolved fluorecence immunanssay TRFIA)是一个灵敏度高、特异性强的新的免疫检测技术[1]，本文应用这一技术对来我院就诊1至4岁的幼儿进行HbsAb浓度检测，其结果如下：
1材料与方法
1.1 标本来源:
正常幼儿血清：取自我院幼儿体检正常人群5890份。
1.2方法和试剂:
测试方法：时间分辨免疫荧光分析法(TRFIA)采用芬兰Wallac-1420时间分辨荧光免疫分析仪,试剂为上海新波生物技术有限公司产品。
2结果与分析
对1至4岁幼儿分三个阶段即1—2岁；2—3岁；3—4岁进行数据统计，结果如下表：
(表中数据为不同 HbsAb浓度的人数占有百分数，其中1—2岁共检测2050人次，2—3岁共检测1900人次，3—4岁共检测1940人次)
1.2 TRFIAcut off值:
TRFIAcut off值的HBsAb浓度≥10mIU/ml时为阳性，HBsAb浓度≥1000mIU/ml为高应答, HBsAb浓度≥100mIU/ml而HBsAb浓度≤1000mIU/ml为中低应答，HBsAb浓度≤100mIU/ml为低定量值，免疫学上为低应答。
1.3 乙肝抗原检测:
所有的观察对象乙肝表面抗体原(HBsAg)定量检测均为阴性。
3 讨论
3.1 乙型肝炎是危害儿童身体健康的严重传染病。2006年我国乙肝血清流行病学调查表明，我国人群乙肝表面抗体原(HBsAg)携带者率已从1992年的9.75%降至7.18%，基本上由高流行向中流行区过渡[2]。现在我国为了减少这一疾病的发生率已免费给新生儿注射3针乙型肝炎疫苗(剂量为5μg重组酵母)，但通过本次试验检测表明给予新生儿3针剂量为5μg重组酵母乙型肝炎疫苗，对1—2岁的幼儿来说还有15.6%的人群没有产生抗体，并且在2岁后存在一个快速的下降期，2岁后没有进行加强疫苗的幼儿有35.9%的人群没有抗体或在1—2岁时10-20mIU/m的人群下降为HBsAb浓度≤10mIU/ml。是否考虑对新生儿免费的疫苗由5μg重组酵母乙型肝炎疫苗增加到10μg重组酵母乙型肝炎疫苗，以提高新生儿HBsAb产生的人群数，使我国的乙型肝炎由中流行向低流行区过渡。
3.2 目前国内检测HBV感染血清学标志物应用较多的仍是ELISA方法。其有以下缺点：1.无法定量；2.灵敏度低；3.由检测原理带来的前带现象无法解决；4.易污染，无法完成HBV感染的动态观察以及低水平HBV感染指标检测。免疫胶体金检测技术可大大缩短检测时间，不需要特殊设备，操作简单，但灵敏度欠佳，假阳性问题难以克服。时间分辨免疫分析技术(TRFIA)是近年发展起来的无环境污染的高灵敏度免疫标记检测技术，因稀土离子本身激发光谱宽荧光发射光谱窄，使这一精密检测技术在普通实验室能够进行[1]。它以稀土离子为标记物，通过时间延迟，去除非特异性荧光干扰，在固定时间检测特异性荧光，解决了自然背景干扰问题，明显提高检测灵敏度。并通过激发光与发射光之间较大的STOKES位移，明显排除非特异性荧光的干扰，提高了光谱的分辨率，使特异性明显增强[3]。HbsAb的定量测定能够对抗体是否真正具有“中和”HBV的免疫力作出正确评价，对乙肝的预防起到监督作用 。因此推广定量测定对乙肝疫苗免疫力的评价和高危人群预防免疫具有重要意义，特别是在少年儿童预防乙肝方面。
3.3 根据乙肝表面抗体的浓度值定期复查或加强乙肝疫苗。观察证明乙肝疫苗接种后，乙肝表面抗体的浓度随时间的推移滴度会在2岁后有一个明显的下降。当乙肝表面抗体浓度下降到保护值以下时将不再对乙型肝炎病毒有免疫力。因此，可根据乙肝表面抗体的浓度值来确定接种乙肝疫苗：若乙肝表面抗体的浓度在<10 mIU/ml时最好按初种的剂量和时间方案进行重新全程10ug接种。乙肝表面抗体的浓度在10 mIU/ml～100 mIU/ml时最好复种一次 ......
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