逐淤化痰汤对脑出血大鼠细胞凋亡及Bck-2蛋白表达的影响
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【中图分类号】R-332【文献标识码】A【文章编号】1005-2720(2009)04-0252-02
【摘要】目的：探讨逐淤化痰汤对脑出血大鼠血肿周围脑组织细胞凋亡及Bcl-2蛋白表达的影响。方法：90只SD大鼠随机分为逐淤化痰汤、脑出血和假手术组，各30只。用尾状核注射自体血法建立脑出血模型；在不同时间点检测神经细胞凋亡数及Bcl-2蛋白表达的变化。结果：在相同时间点逐淤化痰汤组细胞凋亡数低于脑出血组，而Bcl-2蛋白表达水平高于脑出血组。结论：逐淤化痰汤可抑制出血后神经细胞凋亡，此作用可能与其上调Bcl-2蛋白表达水平有关。
【关键词】逐淤化痰汤；脑出血；细胞凋亡；Bcl-2蛋白
脑出血(ICH)是神经系统常见病和多发病。研究表明，细胞凋亡机制参与脑出血后继发性神经细胞损伤[1]。逐淤化痰药物在脑出血的治疗中仍然发挥着重要作用，逐淤化痰汤(Zhuyuhuatan oral liquid)经临床证实对治疗脑出血有确切疗效，但多用于恢复期。本实验观察大鼠脑出血急性期应用逐淤化痰汤后血肿周围脑组织内细胞凋亡及Bcl-2(B细胞淋巴瘤/白血病-2)蛋白的表达情况，为逐淤化痰汤治疗急性期脑出血提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 实验动物：SD大鼠90只，体重250~300g(辽宁医学院动物中心)。
1.1.2 试剂和仪器：逐淤化痰汤(锦州医药公司)，Bcl-2测定试剂盒(购自武汉博士德公司)，Tunel试剂盒(购自武汉博士德公司)，立体定位仪(美国STOELTING公司)，微量进样器(上海安亨微量进样器厂)。
1.2 方法：随机分为假手术、脑出血、逐淤化痰汤组，每组30只；按术后1、2、3、5、7d，各6只。造模后6h开始按每次1g/kg，2次/d，灌喂给药，脑出血组造模后灌喂等量生理盐水。假手术组除不注血外，其余同脑出血组。参照Xue[2]方法制备脑出血模型。立体定位仪引导下向尾状核(前囟后0.2mm，矢状缝向右旁开3.0mm，深度6.0mm)注入自体尾血50μl；以25μl/min速度2min注入完毕；留针10min。假手术组除不注血外，余操作同脑出血组。
1.3 指标测定：在高倍物镜下，每张切片中随机选取出血灶边缘相互不重叠的5个视野，计数高倍(400×)镜下细胞凋亡、Bcl-2蛋白阳性细胞数。
1.3.1 细胞凋亡检测：采用细胞凋亡Tunel法，具体操作步骤按试剂盒说明书进行，凋亡细胞为细胞核呈棕黄色着色。
1.3.2 Bcl-2蛋白检测：采用免疫组化SP法，具体操作步骤按试剂盒说明书进行，鼠抗Bcl-2多克隆抗体工作浓度为1∶100。Bcl-2蛋白以细胞胞质呈棕黄色着色为阳性细胞。
1.3.3 数据处理：实验数据用(x±s)表示，组间比较均采用方差分析。
2 结果
2.1 细胞凋亡：假手术组凋亡细胞在各时间点均有少量表达，而ICH组第1天开始明显增多，第2天达到高峰，之后逐渐减少，第7天仍有凋亡细胞存在，逐淤化痰汤组与ICH组比较凋亡细胞数各时间点均有显著降低(P<0.05或P<0.01)。
2.2 Bcl-2蛋白表达的变化：在假手术组Bcl-2蛋白表达阳性细胞数较低；ICH组与假手术组相比，Bcl-2蛋白阳性细胞数均明显增加(P<0.05)；与ICH组比较，逐淤化痰汤组Bcl-2蛋白阳性细胞数显著增加(P<0.05)。见表1。
3 讨论
有研究证实脑出血后脑血流量降至正常的25%~50%，并在出血后24~48h内基本恢复正常。这种相对温和的缺血尚不足以引起脑梗死，但却易导致脑细胞凋亡[3]。可见细胞凋亡是不同于细胞坏死的一种细胞死亡形式，其过程受一系列相关基因的调控。Bcl-2家族在凋亡调控基因中位于重要地位，Bcl-2蛋白是其中一种重要的膜合蛋白，为中枢神经系统主要的神经保护性蛋白，通过阻止细胞凋亡的早期环节而发挥作用，它的表达是抑制细胞凋亡的关键步骤；脑出血后细胞凋亡的高峰在48~72h，这种高峰与临床上病情的继发性加重的过程一致，故认为凋亡可能是脑出血后血肿周围神经细胞迟发性损伤的重要机制，并且在一定程度上反映了其损伤的程度。
综上所述，逐淤化痰汤具有上调脑出血后Bcl-2蛋白，抑制神经细胞凋亡的作用 ......
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