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编号:11783883
缺氧缺血性脑损伤新生猪海马皮层琥珀酸脱氢酶活性变化(2)
http://www.100md.com 2009年2月15日 《中国保健》 2009年第5期
     1 材料和方法

    1.1 研究对象:新生1~3d龄健康小猪60只,均为白猪,反应佳,进食好,外观无异常。同一窝小猪随机分成对照组、HIBD后0h组、24h组、48h组、72h组和96h组,每组各10只,各组小猪体重经统计学处理,无显著性差异(P>0.05)。

    1.2 HIBD动物模型制作[6]:新生猪用1%普鲁卡因局部麻醉后,结扎左颈总动脉。术毕30~60min后将新生猪置容器中放置2h,即为新生猪动物模型。取出新生猪放入自然空气中,根据放入自然空气中的不同时间定为HIBD后0h、24h、48h、72h、96h五组,对照组行假手术,分离左侧颈总动脉,但不结扎。

    1.3 脑海马皮层组织采集:以上各组猪于预定时间行断头术处死后,立即取出左侧大脑半球,迅速去其蛛网膜及血管,切取海马区皮层组织约1g,放入带有冰渣的脑分离介质的烧杯内备用。

    1.4 线粒体的提取及蛋白定量

    1.4.1 线粒体提取

    1.4.1.1 用分离介质清洗脑组织3遍,剪碎,加脑分离介质5ml搅拌后装入25ml的匀浆器内,上下匀浆30~50次,制得脑组织匀浆。

    1.4.1.2 脑组织匀浆分装于两个离心管内,2000r/min离心3min。

    1.4.1.3 取上清液装入另两个离心管内 ......
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