抗纤灵对5/6肾切除大鼠骨髓来源的成纤维细胞表型转化的影响(2)
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参见附件。
1.7.2 α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原和CD45蛋白的表达检测 采用Western Blotting法。步骤如下：切取新鲜冻存肾组织，匀浆器充分研磨、匀浆，加入RIPA buffer蛋白裂解液，4 ℃，14 000 r/min离心15 min，提取肾组织细胞浆蛋白，Bradford法测定蛋白浓度。在10%的聚丙烯酰胺凝胶上电泳，电压60 V、30 min，80 V、90 min。室温恒压100 V 转膜60 min，分离蛋白，使之转移至PVDF膜上，用TBS缓冲液洗膜5 min。5%脱脂奶粉封闭1 h，按1∶3 000加入α-SMA和CollagenⅠ第一抗体，1∶2 000加入CD45第一抗体，1∶5 000加内参β-actin抗体，4 ℃摇床轻摇过夜。去一抗，TBST缓冲液洗3次，每次5 min，再加入相应辣根过氧化物酶标记的第二抗体(1∶10 000)，室温孵育1 h，TBST缓冲液洗3次，每次5 min。ECL试剂显色并曝光成像，凝胶成像系统成像，用Bio Rad quanity one软件对条带进行半定量分析，CollagenⅠ、α-SMA和CD45蛋白质相对含量分别用其与β-actin特异性条带的积分光密度之比值表示。
1.8 统计学方法
应用SPSS16.0软件进行统计分析。计量资料用—x±s表示，组间比较用方差分析，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果(见表1、表2、图1)
3 讨论
CD45是单链跨膜糖蛋白 ......
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