去势大鼠骨质疏松症基因表达谱特征初步分析(2)
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2 实验方法
2.1 分组
动物适应性饲养1周后，随机分为模型组和假手术组，每组10只。
2.2 造模
按照绝经后骨质疏松症动物造模方法[1]，以2%戊巴比妥钠(0.2 mL/100 g)麻醉，在无菌条件下从距离大鼠第一胸腰椎外侧1 cm处纵向切开皮肤及两侧肌肉，摘除双侧卵巢；假手术组则切除等同于卵巢体积大小的脂肪。止血后分两层缝合，术后连续3 d大腿肌肉注射青霉素，每只大鼠4万U/d。
2.3 指标检测
2.3.1 造模指标检测 造模13周后处死大鼠，取完整左右后肢及第2～4腰椎，保留骨膜，去除其他组织。骨密度检测：取第2～4腰椎骨用湿纱布包裹，送湖南中医药大学附属第一医院骨密度室；骨生物力学检测：取右胫骨用湿纱布包裹，送国防科技大学物理系测骨最大弯曲强度；病理学检测：取左胫骨用4%多聚甲醛固定48 h，然后用5%硝酸脱钙1周，送湖南中医药大学病理检验中心观察组织形态变化，测量平均骨小梁密度。
2.3.2 RNA 提取、纯化、质检、放大 取左侧股骨加液氮研磨按照Unizol试剂(上海博星基因芯片有限责任公司)提取方法提取总RNA。使用QIAGEN Rneasy Kit纯化总RNA。经分光光度计检测吸光度(A)，并进行保温试验，于-20 ℃和70 ℃保温1 h后，用1%琼脂糖凝聚电泳检测28 s，18 s 条带进行质检。然后使用Ambion Illumina RNA Amplification Kit进行RNA线性扩增 ......
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