HPLC-ELSD同时测定筋骨草药材中 乙酰哈巴苷和哈巴苷含量(2)
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A
B
注：A.对照品；B.供试品；1.哈巴苷；2.乙酰哈巴苷
图1筋骨草药材中乙酰哈巴苷和哈巴苷HPLC-ELSD图
2.2对照品溶液的制备
分别精密称取乙酰哈巴苷和哈巴苷适量,置10 mL棕色容量瓶中,甲醇溶解定容,分别配制成1.732 mg/mL的乙酰哈巴苷对照品储备液和0.162 mg/mL的哈巴苷对照品储备液。
2.3供试品溶液的制备
取筋骨草药材干燥,取本品粉末(过50目筛)0.5 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入50%甲醇50 mL,称定质量,超声处理(功率250 W,频率50 kHz)30 min,放冷,再称定质量,用50%甲醇补足减失的质量,摇匀,滤过,取续滤液作为供试品溶液[1]。
2.4线性关系考察
取乙酰哈巴苷储备液和哈巴苷储备液,分别配制成浓度为1.732、17.32、34.64、86.6、173.2、866.0、1732.0 最/mL的乙酰哈巴苷对照品溶液和0.324、3.24、8.1、32.4、81.0、162.0 最/mL的哈巴苷对照品溶液。分别精密吸取各对照品溶液10 L,注入液相色谱仪,测定峰面积。分别以乙酰哈巴苷和哈巴苷质量浓度的自然对数为横坐标,峰面积的自然对数为纵坐标,进行线性回归分析。乙酰哈巴苷回归方程为Y＝1.448 3X+1.035 1,r2＝0.991 3,哈巴苷回归方程为Y＝0.970 5X+0.229 8,r2＝0.993 0。结果表明,乙酰哈巴苷在0.017～17.32 最、哈巴苷在0.003～1.62 最范围内其质量浓度自然对数与峰面积自然对数呈良好线性关系。
2.5检测限考察
分别配制不同浓度的乙酰哈巴苷和哈巴苷的对照品溶液,以信噪比3∶1为指标,考察其检测限。结果表明,乙酰哈巴苷和哈巴苷的检测限分别为0.577、0.108 最/mL。
2.6精密度试验
分别取86.6、173.2、866.0 最/mL乙酰哈巴苷对照品溶液和8.1、16.2、81.0 最/mL哈巴苷对照品溶液,进样10 μL,连续进样5次,在上述色谱条件下,测定峰面积,并计算RSD值 ......
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