甘青青兰生品和炒制品总黄酮、总多酚含量及其2 2—二苯基—1—苦肼基自由基清除能力比较(3)
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3.1.8 样品含量测定 分别准确吸取供试品溶液1.0 mL，分别置于25 mL容量瓶中，按“3.1.3”项下方法操作，测定吸光度，分别计算其中总黄酮和总多酚的含量
3.2 2，2-二苯基-1-苦肼基自由基清除能力测定
3.2.1 样品溶液的制备 精密称取甘青青兰生品和炒制品提取物各0.050 1 g，用甲醇溶解，定容至50 mL，即得。
3.2.2 2，2-二苯基-1-苦肼基溶液的配制 精密称取DPPH 0.020 2 g，加甲醇溶解，定容至50 mL，作为储备液。精密移取上述储备液10 mL至100 mL量瓶中，定容，得40.4 mg/L的储备液，备用。
3.2.3 对照品溶液的制备 精密称取2，6-二叔丁基对甲酚(BHT)甲醇溶液与维生素C水溶液，分别用乙醇溶解，均配置成10份不同浓度溶液。
3.2.4 标准曲线的绘制 分别精密移取DPPH储备液0.25、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0 mL于7个10 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，以甲醇溶剂为参比，在一定波长处测定各溶液的吸光度。以DPPH质量浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，计算得回归方程A=0.015C+0.036(r2=0.999)，线性范围为5.2～31.2 mg/L。
3.2.5 自由基清除率测定 样品溶液分别用乙醇溶解，均配置成10份不同浓度的供试液。分别取不同浓度供试液0.2 mL及25 mg/L DPPH溶液7.8 mL加入同一具塞试管中，摇匀。40 min后用95%乙醇溶液作参比，测其在517 nm波长的吸光度Ai，同时测量0.2 mL供试液与7.8 mL 95%乙醇溶液混合后的吸光度Aj，以及25 mg/L DPPH溶液7.8 mL与0.2 mL 95%乙醇溶液混合后的吸光度Ac。根据公式计算自由基清除率(SR)，SR(%)=[1-(Ai-Aj)/Ac]×100%。所有试验重复3次。用同样方法测定对照品维生素C水溶液与BHT甲醇溶液的SR[12-13]。
3.2.6 自由基清除效率测定 SR在15%～75%范围内，该值与样品浓度有很好的线性关系，但超过此范围时，SR不随样品浓度的增加而增加，因此对SR值超过50%的样品需进一步采用自由基清除效率(SE)来评估其抗氧化活性。按公式SE=1000/IC50计算(IC50指SR为50%时的样品溶液浓度)[12-13]。3 讨论
本试验以芦丁和没食子酸为对照品，采用显色反应稳定的NaNO2-Al(NO3)3-NaOH法和Folin-Ciocalteu法测定甘青青兰生品和炒制品乙醇提取物的总黄酮、总多酚含量。结果显示，甘青青兰生品中总黄酮含量(6.442%)甘青青兰炒制品>BHT>维生素C，SE甘青青兰生品
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