栀子样品湘栀19、湘栀18、大叶栀子、野生栀子、雀舌栀子分别采自湖南长沙、浏阳及河南等地，经本校中药资源教研室周日宝教授鉴定(详见表1)， -70 ℃保存。

    10×PCR buffer(Fermentas)，Taq酶(2.5 U/μL， TOYOBO Co.LTD，Japan)，琼脂糖(Promega有限公司，Spain分装)，TaKaRa PMD19-T Vector、PCR扩增引物(见表2)、dNTPs均购置于大连宝生物工程有限公司，溴化乙锭、10×loading buffer、DEPC、IPTG、X-gal、氨苄青霉素均购于合肥博美生物技术有限责任公司，100 bp DNA ladder Marker(北京鼎国生物技术有限公司)，QIAEX Gel Extraction Kit(凝胶回收试剂盒，QIAGEN公司，America)，β-巯基乙醇(Sigma Chemical Co.)，DH5α(湖南中医药大学病原微生物实验室提供)，其余试剂均为国产分析纯。

    2 方法

    2.1 叶绿体DNA提取及浓度检测

    取栀子新鲜叶去中脉约1.0 g ......