2.5 蛋白印迹法检测热休克蛋白70的蛋白表达

    收集各组细胞，PBS洗涤，裂解细胞提取总蛋白，考马斯亮蓝法绘制标准曲线，测定蛋白浓度。每组各取50 μL蛋白，经SDS PAGE电泳后转至PVDF膜，5%脱脂奶粉封闭1 h，分别加HSP70，β-actin抗体4 ℃孵育过夜，加辣根过氧化物酶标记羊抗兔IgG于37 ℃孵育1 h，加ECL发光试剂孵育1 min，暗室将膜在感光胶片上曝光，加显影液，定影液洗像。用Alpha Imager 2200图像分析系统进行灰度扫描，计算HSP70与β-actin灰度比值。

    2.6 一氧化氮含量测定

    按试剂盒说明书操作，应用硝酸还原酶法及分光光度法测定各组细胞培养上清液中NO含量。

    3 统计学方法

    采用SPSS11.5统计软件进行分析。实验数据以—x±s表示，组间计量资料采用方差分析。P<0.05表示差异有统计学意义。

    4 结果

    4.1 当归红芪超滤物对过氧化氢致内皮细胞早期凋亡的影响

    D1象限代表细胞收集过程中机械损伤细胞碎片；D2象限代表晚期凋亡与坏死细胞；D3象限代表正常细胞；D4象限代表早期凋亡细胞 ......