香砂六君子汤对脾胃虚弱型萎缩性胃炎大鼠胃排空功能及胃蛋白酶活性和缺氧诱导因子—1α表达的影响(3)
反转录合成模板cDNA：在0.5 mL去酶管中加入总RNA 5 μg、15×Oligo dT 1 μL、Random Primer 1 μL，加Nuclease-Free Water至10 μL；70 ℃变性5 min，然后冰上放置5 min以上；加入反转录GoScriptTM 5×Reaction Buffer 4 μL，MgCl2(25 mmol/L)2 μL，PCR Nucleotide Mix(10 mmol/L)1 μL，Recombinant Rnasin Ribonuclease inhibitor 0.5 μL，GoScriptTM Reverse Transcriptase 1 μL，Nuclease-Free Water至10 μL，总体积为20 μL。混匀配制的反应混合物，短暂离心后在25 ℃温浴5 min，42 ℃反应60 min，再70 ℃、15 min灭活处理，所得单链cDNA放置于-20 ℃备用。从NCBI中查询目标基因ID及序列，由TAKARA公司宝生物工程(大连)有限公司设计和合成目标基因引物。HIF-1α引物序列为：上游5'-CCAGATTCA AGATCAGCCAGCA-3' ......
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