2.4 指标检测

    2.4.1 免疫荧光法检测室管膜下区神经干细胞增殖 常规脱蜡至水，3%H2O2-甲醇室温孵育30 min，微波修复，10%羊血清湿盒内37 ℃孵育30 min，一抗Brdu抗体1∶100稀释，湿盒内4 ℃孵育过夜，二抗CY3-羊抗兔IgG 1∶300稀释，湿盒内37 ℃孵育45 min，DAPI复染细胞核。各步均用PBS震荡漂洗3次，防淬灭剂封片，倒置荧光显微镜下观察并采集图像。细胞核染色为蓝色，细胞核出现红色荧光者为Brdu阳性细胞，随机观察5个不重叠高倍视野，计数阳性细胞数及总细胞数，计算阳性细胞百分率(阳性细胞数÷总细胞数×100%)。阳性细胞百分率越高表示增殖细胞越多。

    2.4.2 PCR检测室管膜下区Hes1、Hes5 mRNA表达 分离0.1 g SVZ脑组织，应用Trizol试剂盒提取总RNA，以紫外分光光度计A280、A260定量测定浓度；将总RNA经琼脂糖凝胶电泳鉴定，可见明显的2条区带(28 s、18 s)，证明其完整性。以组织总mRNA，反转录合成cDNA，60 ℃退火，用SYBR法进行RT-qCR。Taq酶催化，95 ℃预热10 min后，40个PCR循环。采用2-ΔΔCt法，以2-ΔΔCt值反映目的基因表达水平 ......