多指标正交试验优化理冲生髓饮的醇提工艺(1)
摘要：目的 优选理冲生髓饮的最佳醇提工艺。方法 采用L9(34)正交试验法，以毛蕊异黄酮葡萄糖苷、淫羊藿苷、宝藿苷Ⅰ、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd、黄芪甲苷的转移率和干膏得率为指标，通过综合评分法，考察乙醇浓度、提取时间、提取温度、溶媒用量对理冲生髓饮醇提工艺的影响。结果 最佳提取工艺为：10倍量60%乙醇浸泡2 h后，加热回流提取2次，提取时间1.5 h，提取温度80 ℃。结论 该工艺提取率高，工艺稳定、可行，可为理冲生髓饮的进一步研究提供数据。
关键词：理冲生髓饮；正交试验；多指标；醇提工艺
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2017.07.018
中图分类号：R283.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304(2017)07-0076-05
Abstract： Objective To optimize the ethanol extraction technology of Lichong Shengsui Decoction. Methods An L9(34) orthogonal test was used in the study. The extraction rates of calycosin glycoside， icariin， baohuoside Ⅰ， ginsenoside Rg1， ginsenoside Re， ginsenoside Rb1， astragaloside， and ginsenoside Rd were set as indexes. The influence of ethanol concentration， extraction time， extraction temperature， and amount of ethanol on the yield of Lichong Shengsui Decoction were detected by comprehensive scoring method. Results The optimal ethanol extraction technology for Lichong Shengsui Decoction was soaking for 2 h with ten times of 60% ethanol and then reflux extracting for two times； extraction time was 1.5 h each time at 80 ℃. Conclusion The optimal extraction technology is efficient， stable and feasible， which can provides data for the further study of Lichong Shengsui Decoction.
Key words： Lichong Shengsui Decoction； orthogonal test； multi-index； ethanol extraction technology
理冲生髓饮是国家级老中医、黑龙江省名中医王秀霞教授在理冲丸的基础上结合多年临床实践总结出的有效防治卵巢肿瘤的中药复方制剂。现代研究表明其可提高卵巢癌患者的免疫功能[1]，对人卵巢癌细胞SKOV3的体外生长有抑制作用，可阻断Bcl-2癌基因蛋白表达[2-3]，对化学致癌因子诱发的大鼠卵巢肿瘤有抑制和阻断作用[4]，对P53基因蛋白、血管内皮生长因子基因蛋白、Casp-8和CXCL2基因的过度表达有调节作用[5-7]。理冲生髓饮具有破血消癥、软坚散结、补气养血、填精益髓之功。方中所含有效成分种类众多，包括挥发油类、皂苷类、黄酮类、多糖
类等。其中，毛蕊异黄酮葡萄糖苷、淫羊藿苷、宝藿苷Ⅰ、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人參皂苷Rb1、人参皂苷Rd和黄芪甲苷等成分具有抗肿瘤、提高免疫功能等活性[8-14]。本研究采用正交试验法，考察乙醇浓度、提取时间、提取温度、溶媒用量对上述成分转移率和干膏得率等多指标的影响，优选理冲生髓饮的醇提工艺，以期为理冲生髓饮的进一步深入研究提供数据。
1 仪器与试药
SFE220-40-100超临界萃取装置(江苏温奥机械设备有限公司)，AK-400B中药粉碎机(泰州金诚制药机械有限公司)，DZF-6050真空干燥箱(北京北方利辉试验仪器设备有限公司)，KDM-1000调温电热套(江苏杰瑞尔电器有限公司)，TGL-16G高速离心机(北京佳源兴业科技有限公司)，FA2104A电子分析天平(上海精天电子仪器有限公司)，LC-20AT高效液相色谱仪(日本岛津公司)，BenchTop K真空冷冻干燥机(美国VIRTIS公司)，WFZUV-4802H紫外分光光度计(上海尤尼柯仪器有限公司)，N1100-OSB- 2100旋转蒸发仪(上海爱朗仪器有限公司)。
理冲生髓饮方中各药(人参、黄芪、淫羊藿、莪术等)均由黑龙江中医药大学第一附属医院提供，经黑龙江中医药大学孙慧峰教授鉴定均符合2015年版《中华人民共和国药典》各药项下规定。对照品人参皂苷Rg1(批号110703-201128)、人参皂苷Rb1(批号110704-201424)、人参皂苷Re(批号110754- 201324)、黄芪甲苷(批号110781-201314)、毛蕊异黄酮葡萄糖苷(批号111920-201304)、淫羊藿苷(批号110737-200415)、宝藿苷Ⅰ(批号111852-201102)，中国食品药品检定研究院；人参皂苷Rd(批号MUST- 11041212)，成都曼斯特生物科技有限公司。乙腈(GR级，美国迪马科技有限公司)，磷酸(GR级，天津赛孚瑞科技有限公司)，HPLC所用水为屈臣氏蒸馏水，实验用水为重蒸馏水，其余试剂均为分析纯。, 百拇医药(王艳宏 赵娟萍 尚冬雪 赵雪 田苗 韩凤娟)
关键词：理冲生髓饮；正交试验；多指标；醇提工艺
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2017.07.018
中图分类号：R283.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304(2017)07-0076-05
Abstract： Objective To optimize the ethanol extraction technology of Lichong Shengsui Decoction. Methods An L9(34) orthogonal test was used in the study. The extraction rates of calycosin glycoside， icariin， baohuoside Ⅰ， ginsenoside Rg1， ginsenoside Re， ginsenoside Rb1， astragaloside， and ginsenoside Rd were set as indexes. The influence of ethanol concentration， extraction time， extraction temperature， and amount of ethanol on the yield of Lichong Shengsui Decoction were detected by comprehensive scoring method. Results The optimal ethanol extraction technology for Lichong Shengsui Decoction was soaking for 2 h with ten times of 60% ethanol and then reflux extracting for two times； extraction time was 1.5 h each time at 80 ℃. Conclusion The optimal extraction technology is efficient， stable and feasible， which can provides data for the further study of Lichong Shengsui Decoction.
Key words： Lichong Shengsui Decoction； orthogonal test； multi-index； ethanol extraction technology
理冲生髓饮是国家级老中医、黑龙江省名中医王秀霞教授在理冲丸的基础上结合多年临床实践总结出的有效防治卵巢肿瘤的中药复方制剂。现代研究表明其可提高卵巢癌患者的免疫功能[1]，对人卵巢癌细胞SKOV3的体外生长有抑制作用，可阻断Bcl-2癌基因蛋白表达[2-3]，对化学致癌因子诱发的大鼠卵巢肿瘤有抑制和阻断作用[4]，对P53基因蛋白、血管内皮生长因子基因蛋白、Casp-8和CXCL2基因的过度表达有调节作用[5-7]。理冲生髓饮具有破血消癥、软坚散结、补气养血、填精益髓之功。方中所含有效成分种类众多，包括挥发油类、皂苷类、黄酮类、多糖
类等。其中，毛蕊异黄酮葡萄糖苷、淫羊藿苷、宝藿苷Ⅰ、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人參皂苷Rb1、人参皂苷Rd和黄芪甲苷等成分具有抗肿瘤、提高免疫功能等活性[8-14]。本研究采用正交试验法，考察乙醇浓度、提取时间、提取温度、溶媒用量对上述成分转移率和干膏得率等多指标的影响，优选理冲生髓饮的醇提工艺，以期为理冲生髓饮的进一步深入研究提供数据。
1 仪器与试药
SFE220-40-100超临界萃取装置(江苏温奥机械设备有限公司)，AK-400B中药粉碎机(泰州金诚制药机械有限公司)，DZF-6050真空干燥箱(北京北方利辉试验仪器设备有限公司)，KDM-1000调温电热套(江苏杰瑞尔电器有限公司)，TGL-16G高速离心机(北京佳源兴业科技有限公司)，FA2104A电子分析天平(上海精天电子仪器有限公司)，LC-20AT高效液相色谱仪(日本岛津公司)，BenchTop K真空冷冻干燥机(美国VIRTIS公司)，WFZUV-4802H紫外分光光度计(上海尤尼柯仪器有限公司)，N1100-OSB- 2100旋转蒸发仪(上海爱朗仪器有限公司)。
理冲生髓饮方中各药(人参、黄芪、淫羊藿、莪术等)均由黑龙江中医药大学第一附属医院提供，经黑龙江中医药大学孙慧峰教授鉴定均符合2015年版《中华人民共和国药典》各药项下规定。对照品人参皂苷Rg1(批号110703-201128)、人参皂苷Rb1(批号110704-201424)、人参皂苷Re(批号110754- 201324)、黄芪甲苷(批号110781-201314)、毛蕊异黄酮葡萄糖苷(批号111920-201304)、淫羊藿苷(批号110737-200415)、宝藿苷Ⅰ(批号111852-201102)，中国食品药品检定研究院；人参皂苷Rd(批号MUST- 11041212)，成都曼斯特生物科技有限公司。乙腈(GR级，美国迪马科技有限公司)，磷酸(GR级，天津赛孚瑞科技有限公司)，HPLC所用水为屈臣氏蒸馏水，实验用水为重蒸馏水，其余试剂均为分析纯。, 百拇医药(王艳宏 赵娟萍 尚冬雪 赵雪 田苗 韩凤娟)