2.5 Western blot实验

    2.5.1 脑组织匀浆制备

    行为学测试结束后，冰上取材，分离出皮层、海马等组织。将动物组织(皮层或者海马)称重后按1∶7加裂解液裂解，超声匀浆21 s(7 s×3次)，冰上裂解30 min，取出一部分裂解后的组织加5×上样缓冲液(Loading buffer)混匀(其余组织-80 ℃冻存)，95 ℃加热5 min，12 000 r/min离心30 min，收取上清液，即得变性后蛋白样品。

    2.5.2 胆碱乙酰转移酶、乙酰胆碱酯酶蛋白表达测定

    将变性后的蛋白样品，采用改良RC-DC法进行蛋白定量。取30 μg蛋白样品进行凝胶电泳，经转膜，封闭2 h后，加入一抗兔多克隆抗体孵育1.5 h，4 ℃过夜，TBST漂洗5 min×3次，加入山羊抗兔二抗孵育2 h，TBST漂洗5 min×3次，用化学发光液发光，以GAPDH作为内参，以目标蛋白/GAPDH为蛋白的相对表达量。

    3 统计学方法

    采用SPSS17.0统计软件进行分析 ......